郑凤龙 任喜尚 杨洁

(郑州澍青医学高等专科学校临床医学系，河南 郑州 450064)

急性心肌梗死(AMI)的青年患者数量逐年递增，且男性患者比例较大〔1〕。AMI幸存患者1年后的发病率和死亡率仍高于普通人群〔2〕，而AMI的治疗会引发心肌缺血再灌注损伤(MIRI)，如何避免和减轻MIRI是临床亟需解决的问题，也是AMI临床研究的热点。研究表明，miRNA在心脏病和心力衰竭等过程中也存在调控作用，miRNA可能通过改变关键的信号分子，为MIRI提供潜在的治疗靶点和心肌损伤标志物〔3，4〕。MiR-24主要功能是调节细胞生长与凋亡，参与细胞分化及肿瘤的发生和发展〔5〕。研究表明，心肌梗死后miR-24在心肌组织中表达降低，抑制梗死后心肌细胞的凋亡，改善心肌功能〔6〕。程序化细胞死亡因子(PDCD)5是一种促凋亡基因，在H2O2处理的心肌细胞中表达上调〔7〕。但两者在心肌细胞中的作用机制尚不清楚。本课题以大鼠心肌细胞H9c2为研究对象，建立缺氧/复氧(H/R)模型，研究 miR-24-3p对H/R诱导H9c2细胞损伤、凋亡的分子机制，探讨PDCD5在此机制中的作用，为MIRI的治疗提供新方向。

1 材料与方法

1.1材料 大鼠心肌细胞H9c2购自ATCC；胎牛血清(FBS)和高糖/低糖DMEM培养基购自Gibco公司，胰蛋白酶Trypsin购自Sigma-Aldrich公司；乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒购自北京索莱宝科技有限公司；双荧光素酶报告系统(Dual-Luciferase Reporter Assay System)购自美国Promega公司；Total RNA提取试剂盒、 real-time PCR 试剂盒、反转录试剂盒(RT-PCR)购自宝生物工程(大连)有限公司；抗PDCD5、抗Bcl-2、抗Bax和抗Cleaved-caspase-3抗体购自Abcam公司；双染色流式法细胞凋亡检测试剂盒购自BD公司；流式细胞仪购自BD公司，光学显微镜、全自动酶标仪及Real-time PCR仪购自美国bio-rad公司。……