刘向前 赵天增 杨金华

(南阳医学高等专科学校第一附属医院普胸外科，河南 南阳 473000)

肺癌是全世界人类最常见的一种癌症，其中非小细胞肺癌(NSCLC)约占90%〔1,2〕。由于NSCLC的发病隐秘，临床上大多确诊患者已至晚期，已错过最佳治疗时期，其预后5年生存率不足16%〔3～5〕。目前靶向治疗在很多癌症中均为最有效的治疗方法，因此寻找新的NSCLC分子治疗靶标具有重要意义。长链非编码RNA(LncRNAs)是一类转录长度超过200 nt的长链非编码RNA，其在NSCLC的诊断、治疗中均具有重要作用〔6,7〕。LncRNA GAS5在NSCLC的研究中已证实为异常升高的致癌因子〔8,9〕，但其在NSCLC中具体的作用机制尚未十分清楚。miR-196b-5p在多种癌症中均出现表达异常升高〔10～12〕，包括NSCLC，但其在NSCLC中的调控机制尚未完全清楚。

本研究将以NSCLC细胞A549为研究对象，检测细胞中LncRNA GAS5和miR-196b-5p的表达，观察过表达LncRNA GAS5、抑制miR-196b-5p、过表达miR-196b-5p对NSCLC细胞增殖、迁移、侵袭的影响，揭示其机制可能与miR-196b-5p靶向负调控LncRNA GAS5有关，将为NSCLC的预防和治疗提供依据。

1 材料与方法

1.1材料 NSCLC细胞A549、肺支气管正常细胞16HBE购自ATCC；DMEM培养基、胎牛血清、噻唑蓝(MTT)、胰蛋白酶均购自美国GIBCO公司；LipofectamineTM2000、二喹啉甲酸(BCA)蛋白定量试剂盒、逆转录试剂盒购自大连Takara公司；聚偏二氟乙烯(PVDF)膜购自德国罗氏公司；电化学发光(ECL)液和RIPA蛋白裂解液均购自碧云天生物技术公司；双荧光素酶报告基因检测试剂盒购自美国Promega公司；Transwell小室、基质胶购自美国Coming公司；半干转膜仪购自美国BIO-RAD公司。

1.2细胞培养 采用含有10%胎牛血清的DMEM培养液培养NSCLC细胞A549、肺支气管正常细胞16HBE，置于37℃,5% CO2的培养箱中常规培养。

1.3细胞转染 将miR-196b-5p 模拟……