刘宏 仲丽丽 于颖 张雨薇 杨婧 代巧妹 李冀

(1黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040；2黑龙江中医药大学附属第一医院)

阿尔茨海默病(AD)是一种不可逆转的神经退行性疾病〔1〕，在中医属于“痴呆”范畴，多发生于老年人，由气虚和肾虚所致，结合“肾脑相通”中医理论，补肾治疗AD存在一定的合理性〔2〕。左归丸是传统补肾阴药物〔3〕。据报道，左归丸可通过促进热休克蛋白的表达，抑制AD模型神经细胞的凋亡〔4〕，并且对 AD 大鼠海马和皮质神经元细胞使抗氧化能力增强〔5，6〕。本课题组前期实验发现左归丸可以改善脑缺血大鼠的记忆力〔7〕及提高大鼠脑内雌激素受体(ER)的表达，并且运用ER拮抗剂之后，左归丸的这种神经保护作用大部分消失〔8〕。因此，考虑左归丸对神经元的保护作用可能与下丘脑-垂体-性腺轴(HPG)存在联系。本实验在稳定的AD细胞模型上，探讨左归丸对细胞存活的影响及对ER表达的影响。

1 材料与方法

1.1药品与试剂 Aβ1～42小鼠单克隆抗体(吉尔生化)，左归丸，购自北京同仁堂药店。ER单克隆抗体(wanleibio)、活化的半胱氨酸蛋白酶(Cleaved-Caspase)3单克隆抗体(wanleibio)、羊抗兔IgG-辣根过氧化物酶(HRP)(wanleibio)内参抗体 β-actin(wanleibio)、电化学发光(ECL)液(wanleibio)、大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤分化细胞(PC12)(procell)。

1.2主要仪器 酶标仪(BIOTEK)、电热恒温培养箱(天津泰斯特)、凝胶成像系统(北京六一)超纯水系统(Heal Force 公司)、超速冷冻离心机(湖南湘仪)、CO2培养箱(上海力申)、超净工作台(苏州净化)、RPMI-1640培养基(Gibco)。

1.3药物配制 将5 mg Aβ1～42溶于28.3 μl的二甲基亚砜(DMSO)中，配成浓度为40 μmol/L的储存液，用超纯水稀释，分装保存。取100 μl的Aβ1～42置于37℃培养箱7 d，进行老化处理。……