沈雷 姜杨 张善强 金海峰 姚立杰 张嵩 刘丹阳 李永涛王璐璐

每年全世界死于肺癌的有60万人[1]，目前各种方法仍无法阻止肺癌发展[2]。研究认为，肺癌组织含有的肺癌干细胞可能来源于间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）[3-4]。MSCs具有向远处组织定向迁移等能力，还能够成为肿瘤样细胞[5]。目前认为，结肠癌或乳腺癌等恶性肿瘤发生发展及肿瘤干细胞的形成均与MSCs密切相关[6]。但是肺癌微环境招募MSCs迁移的影响还需要深入研究。

趋化因子是一类肽类家族，该类因子与MSCs表面受体相互结合，具有促进MSCs等细胞迁移的作用[7]。趋化因子-8（C-X-C motif chemokine ligand-8，CXCL-8）随着结肠癌发展呈现高表达，与结肠癌转移密切相关[8]。但是基于CXCL-8的A549细胞与MSCs之间的关系还鲜见报道。本实验从趋化因子角度验证不同浓度A549细胞上清液对hBMSCs细胞迁移的影响，为靶向抑制MSCs迁移到肺癌微环境奠定研究基础。现报道如下。

1 材料与方法

1.1 细胞和主要试剂、仪器 研究时间为2018年1月-2019年10月，人A549细胞购于武汉普诺赛生命科技有限公司；人骨髓间充质干细胞（Human bone marrow mesenchymal stem cells，hBMSCs）由本实验室保存。α-MEM培养基、DMEM培养基、胎牛血清（FBS）购自美国Thermo公司；MTT、二甲基亚砜（DMSO）购于Sigma公司；RIPA细胞裂解液、苯甲基磺酰氟（PMSF）、BCA蛋白检测试剂盒为碧云天生物公司产品，小鼠抗人CXCL-8单克隆抗体和小鼠抗人β-actin抗体、HRP标记的山羊抗小鼠IgG为英国Abcam公司产品；人Erk、p-Erk和PI3K、p-PI3K的ELISA试剂盒购自美国R&D公司。日本Olympus公司的BX50型倒置显微镜。

1.2 实验方法

1.2.1 细胞培养 含10%FBS的DMEM培养基培养A549细胞。含10%FBS的α-MEM培养基培养hBMSCs。所有细胞均未出现衰老或死亡现象。

1.2.2 实验分组 5.5×106A549细胞在37 ℃，5%的CO2培养6 h后，800 r/min离心3 min，提取A549细胞上清液。……