孙德龙

（胶州市现代农业发展服务中心，山东 胶州 266300）

一个蛋鸡养殖场鸡群经常发生大肠杆菌病，表现为轻微的产蛋率下降、畸形蛋，抗生素治疗后鸡群产蛋率逐渐恢复正常。经笔者对养殖场情况的了解，发现此养殖户疏于对饮水系统的定期消毒，于是笔者建议对其水源及入水线处水样和出水线处水样进行细菌检测。

1 材料和方法

1.1 培养基

A：营养琼脂培养基（NA.）（蛋白胨10.0g、牛肉粉3.0g、氯化钠5.0g、琼脂15.0g、蒸馏水1000.0ml）

B：VRB-MUG培养基（蛋白胨7.0g、酵母膏3.0g、乳糖10.0g、氯化钠5.0g、胆盐1.5g、中性红0.03g、结晶紫0.002g、MUG0.1g、琼脂15g、蒸馏水1000.0ml）

1.2 器械（皿）

A：干热消毒的18mm×180mm玻璃试管、2ml吸管、10ml吸管、直径90mm平皿等。

B：水浴锅：向水浴锅内加入纯净水适量，温度调至55℃。

C：其他：灭菌并加塞的250ml玻璃采水瓶、灭菌盐水、液泵、记号笔、试管架、塑料桶等。

1.3 试验方法

大肠杆菌VRB-MUG平板计数法检验程序。

送检水样—10倍系列稀释—选择2～3个适宜连续稀释度的样品匀液，接种VRB-MUG平板—37℃、18～24h—紫外灯照射，计数发荧光菌落—报告结果。

1.4 试验过程

1.4.1 稀释、加样

A：用试管架摆上多组试管，每组2支，每个水样各占一组，每个试管内加入9ml灭菌盐水。

B：在无菌室内先将水样瓶充分摇匀后，再打开瓶塞，从每个水样瓶内取出4ml水样分别加入3个平皿和一组试管的第一个试管内，每个平皿内加入1ml，用于倾注VRB-MUG培养基；试管内的水样用于倾注NA，用1支2ml吸管在第一个试管内反复吸打使之均匀，取出2ml，1ml加入一个平皿中，另1ml加入第二个试管内，做完的2个稀释度分别为10-1和10-2（将10-1、10-2和未稀释水样各做3个重复）。

1.4.2 倾注

将水浴锅中冷却到48～52℃的NA、VRB-MUG液体培养基分别倾注到相应的平皿中，每个平皿约15毫升，倾注后摇匀。……