王荣芳，王洪华，毛景东

（内蒙古通辽市开鲁县种畜场动物防疫监督管理站，内蒙古 通辽 028400）

1 牛副结核病概述

牛副结核病是由副结核分枝杆菌引起的一种慢性消耗性肠炎，对牛养殖业危害较大。本病在我国也一直存在，而且在规模化养殖逐步替代传统散养模式的过程中其对养牛业的潜在威胁逐渐凸显。因此，了解副结核病的发病过程并及时诊断对控制该病的发生至关重要。

牛副结核菌感染的临床表现包括腹泻、消瘦以及产奶量减少等。这些临床症状通常会在初次感染后两到五年出现，发病牛肠壁会明显增厚，抑制营养吸收，随着病程的发展最终消瘦脱水致死。多数牛副结核菌感染发生在犊牛期，被粪便污染的水、牛奶等均为感染途径，同时也可能垂直传播。牛对副结核菌感染的敏感性具有年龄依赖性，犊牛在前3 个月最易感，在4～12 月龄易感性逐渐减弱，这时感染副结核菌需要更高的感染剂量和时间。

2 牛副结核病发病过程

2.1 副结核菌入侵肠道

病原菌最早可经扁桃体黏膜侵入宿主，而扁桃体隐窝可能是副结核菌的感染部位，细菌经扁桃体进入后可随血液扩散到肠系膜淋巴结和回肠，但多数研究表明其入侵部位主要在回肠。副结核菌侵入肠道后，小肠淋巴结中M 细胞携带其穿过上皮细胞，并将细菌释放于黏膜下层，位于黏膜下层的细菌可被巨噬细胞吞噬。有报道称，将副结核菌接种于回肠后，5 h内感染部位巨噬细胞中即可检测到副结核菌的存在，而一旦副结核菌成功在巨噬细胞内寄生，感染将进入下一阶段。

2.2 副结核菌入侵巨噬细胞

巨噬细胞吞噬副结核菌后，首先将试图消灭副结核菌。由Th-1型淋巴细胞产生的多种细胞因子，如干扰素-γ等可以活化巨噬细胞，并对吞噬的副结核菌产生杀灭作用，部分免疫力强的牛可以成功消灭侵入的副结核菌，不会发展为副结核病。但许多受感染牛不能清除副结核菌则会导致其在宿主巨噬细胞内持续生存并继续扩增。目前，副结核菌胞内存活机制还未完全阐述清楚，但有观点认为副结核菌可以阻止巨噬细胞的成熟和酸化。一般情况下，早期感染中，宿主的天然防御机制可将副结核菌限制在肠道组织内，感染扩散的时间会非常缓慢，这种缓慢的病程进展通常可以维持两年以上，期间患病牛通常不会表现出临床症状，减重和对产奶量下降也不明显，检测病原菌和抗体通常会呈阴性，而干扰素检测结果可能为阳性。随着病程的发展，肠黏膜和肠系膜淋巴结中的副结核菌会引发宿主的炎症反应，淋巴细胞、巨噬细胞等向该区域大量转移，随着炎性细胞浸润的增强在肠内形成肉芽肿，并随着副结核菌的持续增殖病情逐渐加重，最终出现临床症状。肉芽肿的形成虽会破坏黏膜层，但同时也可以将吞噬副结核菌的巨噬细胞限制在其中，使病牛呈隐型感染多年也没有明显的临床症状。到病程后期，机体细胞免疫逐渐减弱，由Th1型免疫反应转向Th2型免疫反应，而一旦进入这一过程，病程将会快速发展，此时可在病牛粪便中检测到副结核菌，同时血清抗体检测呈阳性，临床症状也会更加明显。

2.3 病程后期

随着病程发展，肠道内病变将逐渐严重，肉芽肿浸润的范围将逐步扩散并影响到空肠、回肠和盲肠，肠道内大量细胞浸润将影响营养物质的吸收，进而产生腹泻等症状，并出现低蛋白血症。腹泻症状可反复出现数次且药物治疗无效，产奶量随之逐渐减少甚至停止泌乳。临床后期，病牛将向环境中排放大量病原菌，污染畜舍环境、土壤和水源等。此时多数患病牛将被淘汰，如未淘汰病牛将因虚弱脱水而死亡。

3 副结核病的诊断方法

3.1 粪便细菌诊断

采集疑似患病牛粪便或直肠刮取物，用适量蒸馏水冲洗并过滤，制成细菌涂片后抗酸染色观察，如存在红色抗酸短杆菌则可初步怀疑感染，后续也可对冲洗物进行PCR诊断，扩增副结核菌特异性序列IS900，如获得目的条带则可确认感染；同时也可对粪便中副结核菌进行分离培养，但副结核菌生长缓慢，初次分离需6 周以上时间才可获得菌落，如实验条件不够严格很难获得。此外，在感染前期，病牛粪便中不会一直带菌，如有其他抗酸菌存在可能干扰检测结果。

3.2 变态反应

在副结核感染的诊断中，变态反应诊断是最早应用的方法。将副结核菌素皮内注射待检牛，72 h 观察变态反应情况，测量反应前后皮厚差异，根据OIE 诊断标准进行判断。此方法可在发病前期进行诊断，但在病程后期，症状已较明显的病牛变态反应可能会消失。此方法在检测中可能会受到其他分枝杆菌的干扰，特异性不高，还应结合其他诊断方法准确诊断。

3.3 ELISA诊断

ELISA 诊断是目前发展较快也是应用较普遍的检测方法，目前主要是通过检测全血中干扰素-γ的水平来诊断副结核病感染。此方法检测敏感性较高，可用于大量牛群调查，市场上已有商品化的ELISA试剂盒销售。

4 防控措施

目前，治疗副结核病并无特效抗生素，发达国家在发现副结核感染的病牛后通常会立即淘汰。虽然已有商品化的疫苗，但预防效果不佳且干扰诊断，所以并未大面积推广使用。因此，提高饲养管理水平仍是现阶段控制副结核病的最有效方法，在饲养过程中应及时清理粪便，加强新生犊牛护理，尽量减少与成年牛的接触，使犊牛与副结核菌的接触率和接触时间降低，可以有效控制该病发生。此外，规模化养殖场应定期进行检测并及时淘汰病牛。