山羊同期发情-排卵定时人工输精及配套技术程序

2020-12-30郑丽艳王振涛罗明久

山东畜牧兽医 2020年9期

郑丽艳王振涛罗明久

郑丽艳①王振涛②罗明久③*

（①山东省济宁市嘉祥县市场监督管理局 272400 ②山东省德州市陵城区农业农村局 ③山东农业大学动物科技学院山东泰安）

山羊同期发情-排卵和定时人工输精技术是指通过利用外源激素调控山羊的生殖生理，诱导山羊同时发情-排卵，并进行定时人工输精(FTAI)的一项繁殖技术。经过同期发情-排卵处理后的山羊，因发情-排卵时间较为集中，可以不进行发情观察或发情鉴定，在预定的时间内进行人工输精，而且不降低受胎率。在生产实践中，应用该技术程序可减少因安静发情、发情不明显而造成漏配现象的发生，而且因能集中配种和产羔，可促进人工输精技术的推广应用，提高山羊的繁殖和羔羊生产的效率，降低繁殖技术人员和饲养人员的劳动强度，对提升山羊养殖产业化水平具有重要意义。

1 本技术程序适用范围

本程序适于大部分山羊，但在生产实践情况下，山羊的发情-排卵及定时人工输精的结果也会受到山羊的生殖生理、饲养管理、体况和地理位置、气候、光照以及所用激素等多种因素的影响。在奶山羊养殖中，建议慎重应用同期发情-排卵技术，根据产奶需求较为均匀地分布奶山羊配种时间，有利于羊的繁殖和羊奶生产。因此，在应用该技术程序时，需要根据当地的实际情况，参照技术程序有所变化。在后续的研究与应用中，我们将依据不同的饲养地区、山羊的状况及其相关的影响因素，继续进行探索和完善该技术操作程序，以促进养羊业的快速和健康发展。

2 技术程序

本技术程序主要分为同期发情-排卵处理、精液处理、人工输精和繁殖管理等4个方面。

2.1 排卵处理

由于影响山羊同期发情-排卵的因素较多，如（1）季节、气候(光照、温度、湿度、风速、风力)、饲养环境(管理方式、群体效应、公羊效应)和地理位置等自然因素；（2）山羊生理状态(泌乳、应激)、年龄、体况(肥胖、瘦弱)和营养等个体因素；（3）应用激素的种类、性质、生理效能、剂量和方法等。因此，对山羊进行同期发情-排卵处理时，需要根据生产实际情况考虑相应的影响因素。

2.1.1 山羊的准备（1）应用激素处理前，需要对山羊进行妊娠检查，对于确定未孕的山羊方可应用相应激素处理。（2）为了提高山羊的发情-排卵率，采用标准化日粮进行饲喂，同时根据生产实际情况进行打耳号、驱虫、注射三联四防疫苗和传染性胸膜肺炎疫苗等。（3）为了促使母羊能提早发情，应适当缩短母羊哺乳期。对羔羊进行早期断奶时，需要应用人工哺乳及人工育羔等培育技术。（4）应用公羊效应，在母羊群中引入性欲强的腹部佩戴围裙的公羊，2~3次/d，每次1h左右，既有利于促进母羊的卵泡发育，又可避免公羊对母羊的交配。（5）选留体质健壮、体况评分优秀、遗传性能稳定及后代生产性能良好的公羊作为种羊。同时，留作种用的公羊也需易于采精及精液品质良好。

2.1.2 激素的准备（1）为了促进卵泡发育，可注射孕马血清促性腺激素(eCG)或促性腺激素释放激素(GnRH)。（2）为了抑制卵泡发育，可采用含孕激素或其类似物的阴道栓，如海绵栓、CIDR(Controlled Internal Drug Release)或PRID (Progesterone Releasing Intravaginal Device)等。阴道栓处理分为长期处理(13-18d)和短期处理(5-12d)两种。长期处理的发情同期化程度较高，但受胎率较低。短期处理的发情同期化程度较低，但受胎率接近或超过正常水平。这可能是由于孕激素影响精子在生殖道内的运行和活力以及子宫内膜的功能所致。（3）为了促进卵泡发育成熟并排卵，可注射GnRH或其类似物(如LHRH-A3，即促排3号)，也可注射人绒毛膜促性腺激素(hCG)。应用GnRH诱导排卵，有黄体发育不全现象发生，可用hCG或LHRH-A3代替GnRH。（4）为了溶解黄体，可注射前列腺素(PGF2α)或其类似物，如氯前列烯醇、氯前列烯醇钠和D-氯前列醇烯钠等。

2.1.3 孕激素阴道栓(孕激素+eCG+PGF2α+LHR H-A3)应用技术程序（1）在第0d(任意一天)的上午，保定者双手抓住山羊两后肢，倒立提起，双腿夹住肩胛部，腹部朝外。放栓者清洗、消毒外阴部，将涂有润滑剂的阴道栓置入阴道内，前端接近子宫颈外口。需要观察阴道栓是否有脱落的情况，若有脱落，及时再次置入。（2）为了提高母羊卵泡发育率及双羔率，在阴道栓取出前48~24h或同时注射300IU eCG。（3）在第5~12d或13~18d的上午取出阴道栓，直接拉出即可。为了提高同期发情率，在取出阴道栓同时注射PGF2α或其类似物。（4）在阴道栓取出后36h~60h发情，个别羊会在36h内或60h后发情。（5）在第7~14d或15~20d的下午(即阴道栓取出后54~56h)，进行FTAI。为了增加排卵率，可在输精的同时注射LHRH-A3。（6）在第8~15d或16~21d的上午可再次进行人工输精，以提高受胎率。

2.1.4 PGF2α(2次注射)应用技术程序（1）在第0d(任意一天)的上午注射PGF2α。（2）在第7~9d或11~12d(间隔6~8d或10~11d)的上午注射PGF2α。（3）在第9~11d或13~14d的下午进行FTAI(即最后一次注射PGF2α后54~56h)。为了增加排卵率，可在输精的同时注射LHRH-A3。（4）在第10~12d或14~15d的上午可再次进行人工输精，以提高受胎率。

2.1.5 Ovsych(GnRH+PGF2α+GnRH)应用技术程序（1）在第0d(任意一天)的上午注射GnRH。（2）在第7d的上午注射PGF2α。（3）在第9d的下午注射GnRH或hCG(即注射PGF2α后56h)。（4）在第10d的上午进行FTAI。为了增加排卵率，可在输精的同时注射LHRH-A3。（5）可间隔12~16h再次进行人工输精，以提高受胎率。

2.1.6 PGF2α+GnRH应用技术程序（1）在第0d(任意一天)的上午注射PGF2α和GnRH。（2）在第7d的上午注射GnRH。（3）在第14d的上午注射PGF2α。（4）在第16d的下午注射 GnRH或hCG(即最后一次注射PGF2α后56h)。（5）在第17d的上午进行FTAI。为了增加排卵率，可在输精的同时注射LHRH-A3。（6）可间隔12~16h再次进行人工输精，以提高受胎率。

2.2 精液处理

2.2.1 精液采集为了保证公羊建立良好的采精条件反射，需要设置安静、清洁的采精室，应用假阴道法采精。青年羊每周采精2~3d，成年羊每周采精3~4d，采精1~2次/d。

2.2.2 精液品质评定外观检查：精液呈乳白色、云雾状，精液量为1ml左右。活力测定：精子活力在0.9以上。密度测定：精子密度≥20× 108/ml。形态学检查：精子畸形率<14%，精子顶体异常率<14%。

2.2.3 精液稀释（1）稀释液：稀释液可采用如下几种配方：①奶粉稀释液羊奶粉100g，蒸馏水100ml，青霉素10万IU，链霉素0.1g。②鲜奶稀释液取健康牛、羊新鲜奶，水浴(92~95℃) 15min，冷却后去除奶皮，取100ml，青霉素10万IU，链霉素0.1g。③葡萄糖-柠檬酸钠稀释液葡萄糖3g，柠檬酸钠1.4g，加蒸馏水至100ml，青霉素10万IU，链霉素0.1g。④葡萄糖-柠檬酸钠-EDTA稀释液葡萄糖3g，柠檬酸钠1.4g，EDTA0.1g，加蒸馏水至100ml，青霉素10万IU，链霉素0.1g。⑤乳糖-葡萄糖-柠檬酸钠稀释液乳糖4.6g，葡萄糖3.1g，柠檬酸钠1.6g，加蒸馏水至100ml，青霉素10万IU，链霉素0.1g。⑥生理盐水稀释液0.9%氯化钠溶液，青霉素10万IU，链霉素0.1g。（2）稀释方法：山羊新鲜精液中直线前进运动的精子密度可达20~30亿(20~30×108)/ml。将新鲜精液用30℃的稀释液以1:9进行稀释，将稀释液缓慢地加入到精液中。如果精子需要卵黄包被，可在稀释液中加入20%卵黄，制作卵黄包被液，然后将新鲜精液与卵黄包被液以1:1混合，在5min内，30℃，200×g离心10min，去上清，取下层精子，应用稀释液以1:9稀释。精液稀释后，需要进行精子活率和密度评定，以检验稀释效果。

2.2.4 精液保存稀释后的精液可用塑料细管或精液瓶分装，标明种公羊号、采精时间和活率等。在5℃保存备用。在室温下，25℃温水中升温，以备输精。

2.3 人工输精

2.3.1 人工输精方法（1）常用的人工输精方法为子宫颈输精方式。山羊的子宫颈内壁上有许多皱褶，颈管细而弯曲，发情时开张程度较小，增加了人工输精的难度。（2）人工输精时，首先保定母羊，方法与放阴道栓相同，然后擦拭、消毒母羊外阴部及尾部，在母羊外阴部及开膣器末端涂上润滑剂，将开膣器插入母羊阴道内，确定子宫颈外口位置。将输精器插入子宫颈外口内，深度约1~2cm，缓慢注入精液。完成输精后，撤出输精器和开膣器，按摩阴蒂，清洗输精器械。（3）随着腹腔镜技术的应用与推广，可采用腹腔镜进行人工输精，将精液注入子宫角内，可大幅减少精液的用量，并可获得更高的受胎率。

2.3.2 输精时间和次数虽然准确把握人工输精时间是决定山羊受胎率的关键因素，但是采用定时人工输精技术，无需进行发情鉴定，输精时间和次数依据同期发情-排卵技术程序而定。

2.3.3 输精量应用稀释后的精液，每只羊的输精剂量为0.1~0.2ml，输入的有效精子数至少1000万(1×107)个以上。