黄卫国

摘 要：建立了LC-MS/MS快速测定饮料中甜蜜素的方法，该方法样品处理简单，较传统方法可直接进样，干扰较少，在0.05～5.0μg/mL范围内线性良好（r=0.9994），回收率在90.5～98.2%之间，重复性较好，适合于不含脂肪和蛋白质的饮料中甜蜜素的快速检测。

关键词：LC-MS/MS;甜蜜素;饮料

0 引言

甜蜜素（Sodium cyclamate），学名为环己基氨基磺酸钠，化学式为（C6H11NHSO3Na），分子量201.2，作为人工合成的非营养型甜味剂，其甜度为蔗糖的30倍，由于价格较蔗糖便宜，在食品生产中广泛用于蜜饯、酱菜、饮料、糕点等。饮料中的甜蜜素传统检测方法采用气相色谱法和高效液相色谱法，气相色谱法利用甜蜜素与亚硝酸在硫酸介质中反应生产环己醇亚硝酸酯，然后用气相色谱分离氢火焰离子化检测器检测分析;高效液相色谱法则将甜蜜素在强酸溶液中与次氯酸钠反应，生成二氯环己胺，再用正庚烷萃取后通过高效液相色谱进行测定;该两种检测方法实际操作过程繁琐，耗时较长，基体干扰大[1]。为提高检测效率，本实验建立了反相LC-MS/MS快速测定饮料中甜蜜素的方法，该方法前处理简单，可快速测定，用于实际样品检测，结果令人满意。

1 材料与方法

1.1 试剂

乙腈（色谱纯）、乙酸铵（10mmol/L）、甜蜜素标准品、0.45μm微孔滤膜。

1.2 仪器

分析天平、岛津超高效液相色谱LC30A、AB SCIEX三重四极杆质谱仪API-4000。

1.3 实验方法

1.3.1 质谱分析条件

ESI离子源，NEG扫描，IS：-4500V，GS1：45Psi，CUR：

20Psi，GS2：55Psi，TEM：600℃，CAD：6mL/min，MRM模式。

1.3.2 色谱分析条件

色谱柱为安捷伦ZORBAXExtend-C18，150mm×2.1mm（内径），粒度5μm，流动相为85%乙酸铵（10mmol/L）-15%乙腈，流速0.2mL/min，进样体积5.0μL，柱温为室温。

1.3.3 样品处理

称取饮料样品1g于烧杯中，加少量水加热搅拌，趁热转移到250mL容量瓶中，用超纯水定容，取上清液用0.45μm水相膜过滤，滤液直接用液质联用仪分析。

2 结果与讨论

2.1 质谱条件选择

采用ESI负离子模式检测，用针泵吸取0.05μg/mL甜蜜素连续进样，通过调节去簇电压（DP）确定其母离子为178m/z，与理论分子失去一个钠离子的质荷比[M-Na]-吻合，再通过调节碰撞气能量（CE）确定其子离子为79m/z，最后通过扫描确定质谱MRM参数如表1。

2.2 色谱条件选择

由于甜蜜素属于强极性物质，故采用反相C18柱分析，实验中选取安捷伦ZORBAX Extend-C18，150mm×2.1mm（内径），粒度5μm色谱柱，根据2.1质谱条件，考察表2中不同的乙酸铵--乙腈流动相出峰情况。

各流动相的出峰结果如图1，其中a、b、c、d条件下出峰较快，有峰拖尾的现象;g条件下保留时间过长，出峰慢且峰型不好;而e、f条件下e的出峰紧凑，相较f峰型好，保留时间在2.6min左右，符合快速分析要求，因此确定最佳的色谱流动相为e，即85%乙酸铵（10mmol/L）-15%乙腈溶液。

2.3 线性范围和检出限

在上述确定的实验条件下，对浓度为0.05、0.1、0.5、1.0、5.0μg/mL的甜蜜素標样进行测定，以峰面积对甜蜜素浓度作线性分析，得校准曲线方程Y=164107X+2487，相关系数r=0.9994，以三倍信噪比作为检出限，得出本方法甜蜜素的检出限为0.04μg/mL。

2.4 加标回收率

分别选取空白果汁饮料和凉茶饮料试样各6份，向其添加甜蜜素标样0.1mg，按照前面方法处理定容于250mL的容量瓶中，测定其甜蜜素的含量，以此计算其加标回收率。结果计算得到果汁饮料中甜蜜素的加标回收率在90.5～95.2%之间，平均回收率为92.8%，相对标准偏差为1.85%;凉茶饮料中甜蜜素的加标回收率在94.0～98.2%之间，平均回收率为96.0%，相对标准偏差为1.67%。总体而言，在饮料中的甜蜜素的加标回收率高于90%，具体结果见表3。

2.5 样品测定

选取市面上标识含有甜蜜素的某品牌苹果醋，称取1.0752g样品，定容于250mL容量瓶，按本实验方法进行检测，测得样品稀释后浓度为0.532μg/mL，计算得到该果冻甜蜜素含量为0.124g/kg，该结果低于国家标准[2]要求0.65g/kg，说明该方法适合于果汁、凉茶、苹果醋等不含脂肪和蛋白质的饮料中甜蜜素的检测。

3 结论

本实验利用LC-MS/MS建立测定饮料中甜蜜素的方法，与传统检测方法相比，该方法的样品处理简单，分析时间大大缩短，同时检测过程干扰少，重复性好，减少假阳性的可能，适用于不含脂肪和蛋白质的饮料中甜蜜素的快速检测。

参考文献：

[1] GB1886.37-2015.食品安全国家标准食品添加剂环己基氨基磺酸钠（又名甜蜜素）[S].国家卫生和计划生育委员会，2015.

[2] GB2760-2014.食品安全国家标准 食品添加剂使用标准[S].国家卫生计生委，2014.