石蓉/广西柳州市三江侗族自治县动物疫病预防控制中心 545500

禽流感、鸡新城疫均是家禽养殖过程中的常见疫病，一旦发生将会是养殖户承受较大经济损失。HA、HI是兽医实验室检测禽类免疫抗体水平、规划免疫最佳时机的常用手段，目前在基层有较广泛应用。但人为操作规范性、选用标准准确度、材料标准性等诸多因素还会影响检测结果。故而，相关人员一定要扎实掌握试验操作要点及相关注意事项等，力求从根本上保证检测结果的准确度，为防控家禽疫病提供科学指导。

1 采集与处理血样

首先，在血清学检测以及试验研究阶段，采血均是最基础工作项目，采血工作质量直接关系着能否顺利进入试验过程及结果判断情况。在采血期间，要求采血人员在加强自身防护基础上，要严格依照相关规程对采血设施做出消毒、干燥处理，无菌采样。

其次，分离血清阶段中，要静置、倾斜放置试管，将血清析出温度控制在23℃以上，血样基本上能在2h中就可以离析出颜色透亮的血清。若检测到温度在10℃上下波动时，建议快速把试管安放在37℃培养箱持续2～3h[1]。要求相关人员在送样期间不能出现剧烈晃动血样的行为，以防出现溶血情况，待血样被安全送到实验室以后，要快速分离血清，针对无法即刻分离的血清要予以冷藏处理，若发现血清样品有溶血、胶冻等情况，则要坚决弃用。

最后，部分家禽血清鸡红细胞可能会形成非特异性聚集情况，进而诱导了假阳性反应。故而，建议选用待检血清作为血凝试验，若观测到待检血清形成凝集红细胞，则提示存有非特异凝集素，建议快速采用鸡红细胞做出吸附处理。方法如下：量取等体积的鸡红细胞与家禽血清充分混合30min，而后提起清液开展HI试验。判断试验结果期间，相关会发现其和原方法会高一个滴度。这提示在HI阶段，应依照病毒类型及血清来源等信息，及时采用相应处理方法。

2 相关注意事项

2.1 科学选择反应板推荐使用90°有机血凝板，要求在试验整体结束后，严格依照说明书上提出的内容清晰反应板，确保清洁度符合相关规范要求。当下，很多实验室频繁采用一次性V型塑料反应板，用过后无需予以洗刷处理。试验阶段，影加强反应板质量的控制，以防存留问题而导致结果偏离。

2.2 合理选用稀释液HA、HI试验阶段，为将稀释液对检测结果精确度形成的影响降至最低，建议选择符合pH7.2、0.01mol/L的磷酸盐缓冲液（PBS），其用于以上两项试验研究中取得的效果优于生理盐水[2]。

2.3 加样阶段的注意事项首先，在取样环节中，要求移液器只需按至首个档停点，排样阶段要求按至第2档停点，方能保证样品整体排出，从根本上保证取样量的准确度。其次，吸取液体时，松开拇指的速度要迟缓，过程要平稳，切忌出现过快速放开的操作。与此同时，顺沿沿器壁滑出吸头，以上操作的宗旨是剔除除吸头外部吸附的多余液体。再者，加样阶段，切忌吸头与V板孔两者相触及，这是减少或规避交叉污染情况的最基础操作。按照一定比例稀释样品过程中，要求操作人员用拇指缓慢按压、松开移液器按钮，以防形成数目过多的泡沫，降低移液量的准确度，混合均匀性欠佳，对试验检测质量形成负面影响。最后，实际检测工作中，可能在限定在某时段中要求完成一批次血清多种毒株或亚型检测的任务，为规避不同抗原液混淆情况，要求一定要对盛放抗原也的加样槽壁上做出特殊标识。因为一次试验阶段，需要采用数块反应板设施，也应予以标识。

综上所述，采用HA、HI试验检测禽流感与鸡新城疫病毒，多种因素会影响检测结果的精确度。故而，要求相关人员在试验活动中，应严格控制试验条件，严格依照规范要求配制红细胞悬液，并合理调控试验温度以及时间长度，力争将各种因素形成的影响降至最低水平。