阮谦 刘应华 赵谦 王蕾 尹革芬

摘 要：鉴于牛流行热（Bovine Ephemeral Fever，BEF）对养牛行业的危害以及荧光定量PCR技术高效、快速、精准的优点，本研究针对牛流行热病毒（Bovine Ephemeral Fever Virus，BEFV）G基因建立荧光定量PCR检测方法。并用所建立的荧光定量PCR检测方法对临床采集的样本进行检测。结果显示：在GenBank数据库中对BEFV全基因组序列进行比对分析，找出保守序列，设计1对扩增BEFV G基因片段的引物，通过分子克隆构建重组质粒制备标准曲线，扩增效率是95.1%，用所建立的方法检测临床样本，阳性15份，阳性率为75%。该试验成功建立了检测BEFV的荧光定量PCR检测方法，证明云南省的牛场中广泛存在BEFV，建立的荧光定量PCR检测方法对BEFV的临床诊断和流行病学调查等具有应用价值。

关键词：牛流行热病毒;荧光定量PCR;检测方法

牛流行热（Bovine Ephemeral Fever，BEF）是由牛流行热病毒（Bovine Ephemeral Fever Virus，BEFV）引起牛機体内部温度突然升高、呼吸困难、肠胃功能异常、全身无力、不灵活和行动异常的一种传染疾病。该病传播速度极快，很多地方的牛群都难避免，并且流行具有一定的周期性。BEF可导致奶牛产奶量下降，妊娠奶牛出现流产，会给养牛业造成巨大经济损失[1-3]。该病大多发生在夏、秋蚊子活跃期，雨季或昼夜温差大容易引起流行[4]。健康牛被蚊虫叮咬后，如果该蚊虫叮咬过病牛，即会感染。目前，BEFV被归入弹状病毒科，病毒外型为子弹型，核酸为单股负链RNA，有5种结构蛋白，对脂类物质敏感[5-6]。

据近年来的相关报道，BEF对牛群的危害日趋严重，所以需要建立一种实用、敏感且快速便捷的分子检测方法，以便做到早确诊、早隔离、早治疗，最大限度地降低BEF带来的损失[7]。……