辛玲，赵海豹，周越，侯丽

(国家卫生健康委科学技术研究所，北京 100081)

哺乳动物的性腺细胞是抑制素B(Inhibin B，INH-B)分泌产生的主要来源，其分子包含α和β(B型)两个亚单位，通过二硫键结合成αβB形式[1]。动物体内存在INH-B的多种亚基形式，但只有两者结合在一起才有生物活性，其含量变化随年龄有一定的起伏。我们前期研究发现，INH-B在小鼠睾丸和脑组织中均含量丰富，尤其睾丸中的INH-B水平与小鼠周龄有一定的相关性，并且α、βB两个亚基抗体识别蛋白条带在不同周龄不同组织中的分布存在差异[2]，激发我们对脑组织中亚基来源及变化的研究兴趣。本研究通过分析去势小鼠与正常对照小鼠的血清和脑组织匀浆上清中INH-B水平变化以及脑组织中INH-B亚基定位分布差异，进一步了解INH-B分子的分泌来源，为生殖性腺轴中的INH-B分子调控提供实验基础。

材料和方法

一、实验材料

1.实验动物：4周龄SPF级雄性C57BL/6小鼠24只，其中去势小鼠(睾丸切除)12只，正常小鼠12只，购自北京维通利华实验动物技术有限公司(许可证号：SCXK(京)2016-0006)。小鼠在可控的条件下给与充足的水和食物，自由进食，光照时间8：00～20：00，温度为24℃±1℃。本研究获得国家卫生健康委科学技术研究所动物伦理委员会批准。

2.主要试剂：兔多克隆抗体Anti-inhibin beta B抗体(NBP2-16966，Novus，美国)；兔单克隆抗体Anti-inhibin alpha抗体(ab216969，Abcam，英国)；荧光(CY3)标记羊抗兔IgG(BA1032，武汉博士德生物)；浓缩型正常山羊封闭血清(AR1009，武汉博士德生物)；DAPI(C1002，碧云天)；抗荧光淬灭封片剂(0100-01，Southernbiotech，美国)；Inhibin B 定量检测试剂盒(ELISA法)(KR-INH B-001，广州康润科技)。

3.主要仪器：匀浆仪(IKAT25 digital ULTRA-TURRAX，美国)，酶标仪(Wellscan MK 3，Thermo Fisher，美国)，奥林巴斯BX53型生物显微镜(日本)。……