朱卫敏，邓朝晖，姚 强，裴贵珍，贾丽华

(新疆生产建设兵团医院药学部，新疆 乌鲁木齐 830000)

曼陀罗子为茄科植物曼陀罗的干燥成熟种子，是维吾尔医习用药材，有毒，具有镇静、止痈、安神、止咳、平喘的功效，主要用于治疗关节骨痛、胃痛腹痛和咳嗽气喘等[1]。因曼陀罗子有毒，临床应用需特别谨慎，一般用量为0.05～0.1 g，用量稍大，可能会出现中毒反应[2-5]。本研究采用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography，HPLC)测定两种不同炮制方法(甘草制和醋制)制成的曼陀罗子中阿托品和东莨菪碱的含量，并与生品进行对比，比较三者的成分含量，为临床安全用药提供实验依据[6-8]。

1 材料

1.1 仪器

Waters 2695 型高效液相色谱仪(美国waters公司);C21-WK2102型电磁炉(广东美的生活电器制造有限公司);多功能粉碎机(九太800Y，永康市铂欧五金制品有限公司);KQ5200DA型数控超声仪(昆山市超声仪器有限公司)。

1.2 试剂

氢溴酸东莨菪碱对照品(批号为AF8071307，中国药品生物制品检定所)；硫酸阿托品对照品(批号为AF8041420，中国药品生物制品检定所)；甲醇为色谱纯(Fisher公司)，水为二次蒸馏水， 其他试剂均为分析纯，使用前均经0.45 μm微孔滤膜过滤。

1.3 药品

曼陀罗种子自购，经刘强教授鉴定为正品曼陀罗种子。(1)生品，将曼陀罗子药材通过挑选的方法除去石头、泥沙及碎屑等杂质，备用。(2)醋制品，取净选后的曼陀罗子药材500 g，加入醋(乙酸含量5%)10 g，泡润，待药材吸尽醋后放入锅中，以160 ℃的温度不停翻炒，炒制10 min，放凉过筛后备用[9]。(3)甘草制品，取甘草片100 g，加水浸泡30 min，煎煮3次，每次30 min，合并甘草汁，得药汁300 ml；称取曼陀罗子药材500 g，加入甘草汁300 ml后闷润，待吸尽药汁后炒制，炒制温度控制在160 ℃，炒制10 min，放凉过筛后备用[10-11]。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

Super C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相甲醇-水(V∶V=30∶70，水中含0.02 mol/L醋酸钠溶液、0.02%三乙胺，用醋酸调pH至6.0)，流速1.0 ml/min，检测波长215 nm，柱温室温(25 ℃)，进样量10 μl[12]。在该色谱条件下待测组分可达到基线分离，见图1。

A.对照品；B.样品；1.氢溴酸东莨菪碱；2.硫酸阿托品A. reference substance; B. sample; 1. scopolamine hydrobromide; 2. atropine sulfate图1 曼陀罗子生品的HPLC图Fig 1 HPLC of Datura stramonium L.

2.2 对照品溶液的制备

精确称取适量氢溴酸东莨菪碱、硫酸阿托品对照品，用二次蒸馏水溶解并定容于2 ml容量瓶中，分别配制成含氢溴酸东莨菪碱、硫酸阿托品均为1.0 mg/ml的混合对照品溶液[13]。

2.3 供试品溶液的制备

将曼陀罗子生品和两种炮制品粉碎后，过80目筛，取三种药材粉末各5 g，精密称定，置锥形瓶中，加入2 mol/L盐酸溶液10 ml，超声处理(功率250 W，频率40 kHz)30 min，放冷，滤过，滤渣和滤器用2 mol/L盐酸溶液10 ml分数次洗涤，合并滤液和洗液，用浓氨试液调节pH至9，用三氯甲烷振摇提取4次，每次10 ml，合并三氯甲烷液，回收溶剂至干，残渣用流动相溶解，转移至10 ml容量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得[14]。

2.4 标准曲线及检出限

取适量对照品储备液，分别配制成质量浓度为1.38 mg/ml的氢溴酸东莨菪碱和1.075 mg/ml的硫酸阿托品对照溶液。按“2.1”项下方法进样，测定峰面积(Y,mAU)，以对照品质量为横坐标(X，μg)作图，回归分析得出2种组分的标准曲线，见表1。

2.5 精密度试验

在“2.1”项色谱条件下，取氢溴酸东莨菪碱和硫酸阿托品质量浓度分别为1.38、1.075 mg/ml的混合对照品溶液，连续进样5次，测得氢溴酸东莨菪碱和硫酸阿托品峰面积的RSD分别为0.23%、0.22%，均<2.0%，表明仪器精密度良好。

表1 两种有效成分的标准曲线与线性范围Tab 1 linearity and equation of two effective components

2.6 重复性试验

准确称取同一批样品5份约5.0 g，按“2.3”项下方法处理，在相同色谱条件下，分别取供试品溶液10 μl进行测定，结果显示，氢溴酸东莨菪碱和硫酸阿托品的RSD分别为1.5%、1.4%。

2.7 加样回收率试验

准确称取已知含量的同批样品5份约5.0 g，分别加入与样品中氢溴酸东莨菪碱和硫酸阿托品相当的对照品，按“2.3”项下方法处理，按“2.1”项下条件检测，测定其加样回收率，结果见表2。

表2 加样回收率试验结果Tab 2 Results of recovery test

2.8 含量测定

精密称定甘草制、醋制和生品曼陀罗子各3份，按“2.3”项下方法处理，按“2.1”项下条件进样，记录峰面积并计算出东莨菪碱和阿托品的含量，见表3—4(表中，S1、S2、S3为曼陀罗子生品三组平行样品；C1、C2、C3为曼陀罗子醋制三组平行样品；G1、G2、G3为曼陀罗子甘草制三组平行样品)。由于曼陀罗子的主要毒性成分为生物碱，本研究选用东莨菪碱和阿托品2种成分作为评价指标，来判断哪种炮制方法可以降低上述成分的含量。分析数据可知：甘草制和醋制均能降低曼陀罗子中东莨菪碱和阿托品的含量，其中甘草制曼陀罗子中阿托品的含量明显低于醋制品，而东莨菪碱在两种炮制品中含量相差不大。综合分析可得，用甘草汁炮制曼陀罗子的方法优于醋制法。

表3 不同炮制品中东莨菪碱的含量Tab 3 Content of scopolamine in different processed products

表4 不同炮制品中阿托品的含量Tab 4 Content of atropine in different processed products

3 讨论

甘草具有缓解药物毒性、烈性的作用[6]。本研究采用甘草炮制曼陀罗子来降低曼陀罗子的毒性。醋的味酸、苦，性温，并能除臭矫味，除去药材的腥臭和毒性。曼陀罗子的主要毒性成分是生物碱，经醋制后可以中和游离生物碱，降低曼陀罗子的毒性。

曼陀罗子为种子类药材，含有油脂，三氯甲烷萃取过程中乳化现象比较严重，需采用静置、加热等方法来消除乳化现象。

参照文献[9],以甲醇-水(V∶V=40∶60)为流动相，水相中含0.02 mol/L醋酸钠、0.02%三乙胺，用醋酸调节pH至6.0，结果出峰时间不够理想，氢溴酸东莨菪碱的出峰时间在5 min之前且峰形不好。尝试调节甲醇相与水相的比例，出峰时间相应延长，并得到了很好的分离效果。

本研究通过对曼陀罗子生品、甘草制品及醋制品中2种毒性成分的含量进行对比，最终确定甘草汁炮制曼陀罗子减毒的效果优于醋制法，可为今后临床安全用药提供依据。