王秋华 陈丽竹 刘晓丽 黄钧 罗世强 张玲 谢莉 畅荣妮 唐宁( 通讯作者)

( 柳州市妇幼保健院医学遗传科 广西 柳州 545001)

葡萄糖-6- 磷酸脱氢酶（Glucose-6-phosphate dehydrogenase deficiency，G6PD）缺乏症是世界上最常见的单基因病之一，也是一种X 性染色体不完全显性遗传性溶血性红细胞酶缺陷病。我国的发病率为4.4%～16.6%，而广西的发病率则达到10.75%[1]。G6PD缺乏症的实质是G6PD基因发生突变，患者在临床上有多种表现，严重时可导致新生儿期核黄疸引起永久性神经系统的损伤或死亡。

目前G6PD 酶活性的检测是最常用的筛查方法，由于女性杂合子的酶活性具有较大的异质性，该方法容易发生漏诊[2-3]，故建立有效的基因检测方法对于明确诊断疾病，临床合理用药，处理新生儿黄疸及完善人类遗传学资料来说具有重大意义。

1.资料和方法

1.1 一般资料

选取2016 年6 月—2020 年2 月在我院进行G6PD 基因型及G6PD 酶活性检测的260 例女性样本。

1.2 方法

1.2.1 DNA 提取 采用厦门致善生物科技有限公司Lab-Aid 820 全自动核酸提取仪及配套的磁珠法核酸提取试剂盒对血滤纸片样本进行核酸提取。

1.2.2 G6PD 基因型检测 采用厦门致善生物科技有限公司生产的核酸提取试剂盒，检测中国人中常见的12 个位点的基因突变及对应的野生型，结果参照试剂盒说明书进行样本基因型判读。

2.结果

203 例酶活性异常的女性样本中检测出180 例基因突变（88.67%），其中复合杂合突变75 例，纯合突变23 例，杂合突变82 例；57 例酶活性正常的女性样本中检测出48 例基因突变（84.21%），其中复合杂合突变2 例，杂合突变46 例，杂合突变占突变类型的95.83%。在260 例样本中检测出最常见的突变依次为95A ＞G（19.30%），1388G ＞A（18.86%），1376G＞T（20.61%），具体分布情况见表1。

3.讨论

G6PD 酶活性降低是由于G6PD 基因发生变异导致G6PD 酶结构改变引起的，目前发现的G6PD 基因变异绝大多数为点突变，即1 个或2 个碱基替换，极少数为基因片段缺失，暂未发现诸如启动子突变、框架突变及多聚A 位点突变等突变类型。迄今全世界已报道180 多种G6PD 基因突变类型，在我国已发现35种点突变[4]，在260 例样本中检测出最常见的突变为95A ＞G（19.30%），1388G ＞A（18.86%），1376G ＞T（20.61%），与文献报道一致[5]。酶活性异常的女性样本中G6PD 基因突变检出率为88.67%，仍有23 例未检测出突变，有可能是属于12种以外的突变类型，需要进一步测序验证。

G6PD/6PGD 比值法、高铁血红蛋白还原试验、硝基四氮哇蓝法（NBT）、荧光斑点法等是临床上最基本、最常用的筛查G6PD 酶活性的方法，这些方法均不能有效准确检出红细胞G6PD缺乏的杂合子。而在57 例G6PD 酶活性正常的女性患者中检测出48 例基因突变，漏诊率（48/57，84.21%），这提示应用传统的酶活性检测方法可能漏检女性杂合子，导致漏诊率高可能有以下几种原因：

1）常用的筛查方法是基于G6PD 酶活性的测定方法，该方法的参考值只是用（±s）表示。对于酶活性缺乏程度未划分出明确的界限值，而女性杂合子的酶活性可以呈多样性表现。由于表型与基因型不完全一致，使得女性杂合子个体的准确诊断相当困难。现在很多研究者进行大规模新生儿G6PD 酶活性筛查切值的探讨，尤其是女性杂合子切值确定[6-9]，若能通过基因检测与酶活性检测的对比获得女性杂合子的酶活性切值，可通过酶活性检测提高女性杂合子的检出率。2）根据Lyon 假说，女性的两个G6PD 等位基因，有一个处于随机失活状态，女性杂合子实际上含有酶活性正常和缺乏的两类红细胞，两者的比例决定酶活性的检测结果。若女性杂合子中酶活性正常的红细胞比例大于缺乏的红细胞，其酶活性可接近正常；反之则显著缺乏，所以酶活性的检测方法容易出现漏诊。3）G6PD 缺乏症患儿在急性溶血期新生幼稚红细胞增多，新生红细胞酶活性较高，因此在急性溶血期G6PD 重度缺乏者可能酶学检测结果仅轻度缺乏，女性杂合子酶活性可正常。4)G6PD 基因突变类型因素，G6PD 基因突变具有高度的遗传异质性。有研究表明女性杂合子的G6PD 酶活性含量可能与G6PD 基因甲基化的水平有关[10]。此外有研究发现，基因突变类型影响G6PD 酶的功能结构域，从而导致不同水平的酶缺乏症和疾病表现[11]。

表1 260 例女性样本检测出基因突变的分布情况[n(%)]

国内外已广泛证实G6PD 缺乏杂合子可发病，且G6PD 缺乏症杂合子是新生儿高胆红素血症发生的独立危险因素之一，女性杂合子也极有可能发展为有症状的G6PD 缺陷，漏检G6PD 缺乏症杂合子可能对新生儿高胆红素血症的诊断治疗，人体生命健康等方面有极大影响。G6PD 缺乏杂合子的表型变化大，但其基因突变类型相对确定，不受表型变化和酶活性干扰，严提珍等[12]运用多色探针荧光PCR 熔解曲线法对G6PD 基因突变检测，这种方法简易操作，准确度高，快速灵敏。本结果提示利用多色探针荧光PCR 熔解曲线的基因突变检测方法可以有效的检出女性杂合子，而传统的酶学检测极易漏检G6PD 酶活性正常的女性杂合子。为避免漏诊或误诊，应重视基因检测对G6PD 酶活性正常女性的临床诊断价值，将其广泛应用到临床诊断中，与G6PD 酶活性检测相结合，共同指导未来的遗传咨询及精准诊断工作。