副猪嗜血杆菌环介导等温扩增检测方法的建立及应用

2020-11-13李璐璐骆延波张庆赵效南任金瑞胡明张印齐静刘玉庆

山东农业科学 2020年10期

李璐璐，骆延波，张庆，赵效南，任金瑞，2，胡明，张印，齐静，刘玉庆

（1.山东省农业科学院畜牧兽医研究所／山东省畜禽疫病防控与繁育重点实验室，山东济南 250100；2.山东师范大学生命科学学院，山东济南 250014）

副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis，Hps）是存在于猪上呼吸道的一种共栖菌［1］，也是一种条件性致病菌，可以在猪抵抗力较弱或者病毒感染后易感，引起以浆液性或纤维素性多发性浆膜炎、关节炎、脑膜炎等为特征的Gläserser病，也称为副猪嗜血杆菌病［2］。副猪嗜血杆菌病多发于保育仔猪和青年猪［3］，严重时死亡率可达50%以上［4］。

目前对于副猪嗜血杆菌的检测主要采用PCR方法，包括普通 PCR［5］、实时 PCR［6］、荧光定量 PCR［7，8］、多重 PCR［9］等。PCR检测的特异性和灵敏性毋庸置疑，但是需要昂贵的PCR扩增仪和凝胶成像系统。Notomi等［10］在2000年发明了一种环介导等温扩增（loop-mediated isothermal amplification，LAMP）技术，针对靶基因序列的6个区域，设计4条引物，利用Bst DNA聚合酶的链置换作用，在恒温条件下进行高效特异的扩增反应。LAMP技术目前已经用于多种临床常见细菌的鉴定，如大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、肠球菌、铜绿假单胞菌等［11-13］，以及细菌耐药基因和毒力基因的检测［14，15］。本研究拟采用LAMP技术，建立一种针对Hps的快速检测方法，并对该方法的特异性和灵敏度进行研究。