李艳君，薛 珊，董 蓉，赵强元

解放军总医院第六医学中心 检验科，北京 100048

近年来，随着肿瘤、艾滋病等免疫受损患者的增多，免疫抑制剂及广谱抗生素的长期使用，介入治疗手段的开展，真菌感染发病率呈现上升趋势，尤其是侵袭性真菌感染，是感染性疾病死亡的主要原因之一[1-3]。真菌感染病原的快速鉴定对于临床抢先实施抗真菌治疗，降低病死率至关重要。近年来，基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption ionization timeof-flight mass spectrometry，MALDI-TOF MS) 突 破传统方法鉴定耗时长、鉴定能力不足等弊端，在临床得以广泛应用[4-6]。然而由于前处理方法不同，仪器推荐的甲酸萃取法的截断值一般不适用于常规直接涂抹法的真菌鉴定，给鉴定结果的判断带来一定困扰，因此有必要在各自实验室条件下评价适宜的真菌鉴定截断值。本研究对直接涂抹法进行酵母样真菌MALDI-TOF-MS 鉴定的截断值进行评价，详述如下。

资料与方法

1 标本来源 2018 年1 月- 2019 年6 月我中心临床送检真菌培养样本中分离培养出的酵母样真菌共计494 株。

2 仪器与试剂 德国Bruker 公司的Microflex 系列MALDI-TOF 质谱仪及配套的标准品、基质液；法国梅里埃沙保罗真菌培养基；上海一恒MJ-II 霉菌培养箱。

3 真菌分离培养 临床送检样本以三区划线方式接种于沙保罗培养基，28℃培养48 h，挑选乳酪样纯菌落进行后续实验。

4 样品制备 将纯培养菌落用牙签均匀涂抹于靶板上，加1μl 甲酸覆盖，晾干后滴加1μl 基质液，待其干燥后上机鉴定。

5 MALDI-TOF-MS 鉴定 打开Flexcontrol3.4 软件，调节仪器参数，选择377 nm 氮气激光，线性阳离子检测模式，质荷比采集范围2 000 ～ 20 000 Da，激光强度30%，每个样本击打5 个点，每点激光轰击100 次，记录鉴定结果和分值。……