闫海光，唐广海，初照成

沈阳市第二中医医院，沈阳 110101

脑出血是各类型脑卒中中病死率和致残率最高的脑血管疾病，发病率为24.6/10万，且存活者仍有再出血和缺血性脑卒中的风险，预后比缺血性脑卒中差[1]。脑出血可引起不同程度的神经功能缺损，反映神经功能损伤的生物学指标可能对脑出血病情评估和预后预测有重要价值[2]。8-羟基脱氧鸟苷(8-OHDG)是DNA氧化应激损伤因子，可直接产生神经细胞DNA损伤，导致神经功能受损[3]。视椎蛋白样蛋白1(VILIP-1)是一种神经钙传感蛋白，主要调控神经元之间钙离子通道或信号通路，在脑组织损伤时高度表达，是脑神经损伤的特异性标志物，参与脑损伤及神经疾病发病过程[4]。目前8-OHDG、VILIP-1在脑出血中的报道很少见，鉴于两者在神经损伤中的作用，推测其有可能参与脑出血发病和进展。因此本研究检测了118例脑出血患者血清8-OHDG、VILIP-1水平，探讨其与脑出血临床病理特征和预后的关系。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择2017年2月～2019年3月沈阳市第二中医医院神经外科收治的118例脑出血患者(脑出血组)。纳入标准：①经头颅CT或MRI证实存在脑出血病灶；②符合第四届全国脑血管病学术会议中脑出血诊断标准[5]；③首次发病，发病24 h内入院；④年龄18～80周岁。排除标准：①颅脑外伤、颅内动脉瘤所致脑出血；②合并严重心、肝、肾脏器疾病或功能障碍；③精神或神经系统疾病；④急慢性感染、恶性肿瘤、免疫疾病。其中男69例、女49例，年龄51～73(66.32±2.16)岁，基础疾病：高血压35例、糖尿病41例、高脂血症32例。另选择100例我院门诊接诊的体检者为对照组，均经系统检查排除脑血管疾病。其中男56例、女44例，年龄50～75(66.01±2.05)岁，基础疾病：高血压31例、糖尿病36例、高脂血症30例。两组年龄、性别、基础疾病比较无统计学差异。本研究获得我院伦理委员会批准，患者或其家属均签署知情同意书。

1.2 血清8-OHDG、VILIP-1检测 两组入院24 h内采集空腹肘静脉血3～5 mL，取上清置于TDZ4-WS低速自动平衡离心机(长沙湘智离心机仪器有限公司)4 ℃条件下离心，留取血清，保存于-80 ℃超低温冰箱(Thermo Fisher公司)。采用雅培i2000化学发光免疫分析仪及其配套试剂检测血清8-OHDG，采用意大利BIOBASE2000型全自动酶免分析仪，以酶联免疫吸附试验检测血清VILIP-1(试剂盒购自美国Epitope Diagnostics公司)。

1.3 临床病理特征资料收集 ①脑出血患者入组24 h内采用斯堪的纳维亚卒中量表(SSS)[6]评估患者病情严重程度。SSS量表从意识、强烈局部刺激、凝视功能、面瘫、言语、肌力(上肢、手、下肢)、步行能力进行评估，总分0～45分。脑出血组轻型(0～15分)41例、中型(16～30分)50例、重型(31～45分)27例。②采用多田式计算公式计算，出血量(mL)=π/6×长(cm)×宽(cm)×高(cm)，长、宽、高由CT或MRI测量所得，根据出血量将患者分为小量出血(<15 mL)46例、中量出血(15～30 mL)49例，大量出血(>30 mL)23例。③脑出血确诊3个月后采用格拉斯哥预后(GOS)评分[7]评估患者预后，其中预后良好(GOS评分>4分)61例，预后不良(GOS评分≤4分)57例。

2 结果

2.1 两组血清8-OHDG、VILIP-1水平比较 脑出血组血清8-OHDG、VILIP-1水平高于对照组(P均<0.05)，见表1。

表1 两组血清8-OHDG、VILIP-1水平比较

2.2 血清8-OHDG、VILIP-1水平与脑出血临床病理特征的关系 血清8-OHDG、VILIP-1水平随着脑出血量增加、病情严重程度增加而升高(P<0.05)；预后不良者血清8-OHDG、VILIP-1水平高于预后良好者(P<0.05)；不同年龄、性别之间血清8-OHDG、VILIP-1水平差异无统计学意义。见表2。

表2 血清8-OHDG、VILIP-1水平与脑出血临床病理特征的关系

2.3 脑出血患者血清8-OHDG、VILIP-1水平与脑出血量、SSS评分、GOS评分的关系 脑出血患者血清8-OHDG水平与脑出血量、SSS评分呈正相关(r分别为0.462、0.421，P均<0.01)，与GOS评分呈负相关(r=-0.519，P<0.01)；血清VILIP-1水平与脑出血量、SSS评分呈正相关(r分别为0.436、0.426，P均<0.01)，与GOS评分呈负相关(r=-0.504，P<0.01)。

2.4 血清8-OHDG、VILIP-1水平对脑出血预后的预测价值 血清8-OHDG、VILIP-1、8-OHDG+VILIP-1水平预测脑出血患者预后不良的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.822、0.696、0.943，8-OHDG+VILIP-1预测脑出血患者预后不良的AUC高于单独8-OHDG、VILIP-1(z分别为2.031、3.264，P均<0.05)，详见表3。

3 讨论

脑出血是神经外科常见的脑血管疾病，该病发病急，病情进展迅速且凶险，早期得不到有效救治，可导致不可逆转的脑损伤或脑死亡等，病死率非常高，且多数存活者可遗留偏瘫、发音障碍、失语等严重残疾，给家庭和社会带来沉重的负担[8]。早期判断病情和疾病转归有助于指导临床治疗，提高患者存活率，降低残疾程度。颅脑CT和MRI是诊断脑出血、评估病情严重程度的常用方法，但是检测过程复杂、重复性差，无法全面动态评估患者疾病转归，寻找特异性脑损伤相关生物标志物可以更好地指导临床诊治。

表3 血清8-OHDG、VILIP-1、8-OHDG+VILIP-1预测脑出血患者预后不良的效能分析

8-OHDG是内外源DNA氧化损伤的标志物，主要由羟自由基、超氧阴离子组成，作为氧化修饰产物，在ROS作用下脱氧鸟苷C-8位添加一个羟基形成。8-OHDG被特异性DNA修复酶剪切，并随尿液排出体外[9]。8-OHDG通过修饰尿苷酸影响嘌呤、碱基结构，引起DNA双链结构断裂，抑制细胞增殖，促使细胞凋亡[10]。8-OHDG还可通过激活羟基自由基或氧自由基诱导神经系统氧化应激反应，损伤神经细胞线粒体，影响神经细胞能量代谢，导致神经细胞凋亡[11]。8-OHDG在脑梗死患者表达升高，血清8-OHDG水平与大脑中动脉梗死确诊30 d内死亡密切相关(OR=1.568)[12]。抑制氧化性DNA损伤，可减少脑缺血大鼠神经元凋亡，发挥神经保护作用[13]。8-OHDG在脑出血的报道尚不多见，1篇报道结果显示急性脑梗死和脑出血患者血清8-OHDG水平明显升高[14]。本研究结果显示，脑出血患者血清8-OHDG水平高于对照组，且8-OHDG水平与脑出血量、SSS评分呈正相关，与GOS评分呈负相关，说明8-OHDG水平可反映脑出血患者病情严重程度以及疾病转归。8-OHDG参与脑出血及其病情进展的发病机制可能为：脑出血可继发氧化性损伤，氧化应激下ROS大量产生，并迅速破坏机体抗氧化防御机制，造成脑组织损伤；8-OHDG在ROS氧化作用下大量产生，进一步扩大氧化应激反应，并上调凋亡诱导因子表达，促使神经细胞凋亡，抑制神经纤维再生，破坏神经细胞和轴突功能，导致神经功能进行性缺损加重并遗留残疾症状。

VILIP-1属于神经元钙传感蛋白视锥蛋白/恢复蛋白家族成员，在脑组织神经元中表达丰富，主要发挥调控神经元钙离子通道和信号通路作用[15]。当脑组织受损、血脑屏障破坏时，脑组织大量释放VILIP-1进入外周血液循环，血清VILIP-1升高是脑神经元损伤的特异性生物学标志物[16]。既往研究报道，血清VILIP-1水平在缺血性脑卒中患者中明显升高，被认为是一种典型的脑卒中生物标志物，并与患者短期神经功能预后密切相关[17]。VILIP-1在脑出血的报道少见。曾莹等[18]报道显示，高血压脑出血患者血清VILIP-1水平升高，但该研究并未涉及VILIP-1在脑出血的临床意义研究。本研究结果显示，脑出血患者血清VILIP-1水平高于对照组，VILIP-1与脑出血量、SSS评分、GOS评分均存在密切关系，提示VILIP-1同样参与脑出血后神经损伤过程，可反映脑出血患者病情严重程度和短期预后。由于钙离子通道涉及的病理生理机制复杂，VILIP-1在脑组织损伤的致病机制尚未完全明确，可能的机制为：VILIP-1通过参与微管蛋白磷酸化促使Aβ1-42沉积，Aβ1-42发挥神经毒性作用，诱导神经炎症反应和缺血缺氧性损伤，促使神经细胞凋亡，并破坏血脑屏障。提示VILIP-1/Aβ1-42通路可能在脑出血后神经损伤中发挥重要作用。

本研究ROC曲线分析结果显示，8-OHDG对脑出血预后具有较高预测价值，AUC达0.822，灵敏度达84.21%，特异度达81.97%。分析原因为8-OHDG作为氧化反应代谢终产物只能由DNA氧化损伤产生，不受饮食、运动因素影响，体内含量相对稳定，因此可稳定反映脑出血患者短期预后。VILIP-1预测脑出血患者短期预后的AUC达0.696，灵敏度达71.93%，特异度达70.49%，说明VILIP-1评估脑出血患者短期神经预后具有一定真实性和可靠性。8-OHDG和VILIP-1联合大大提高脑出血预后的预测效能，提示血清8-OHDG和VILIP-1水平同时升高的脑出血患者发生不良预后的可能性更大，联合两项指标检测对预后评估更具价值。

综上可见，脑出血患者血清8-OHDG、VILIP-1水平升高，高水平8-OHDG、VILIP-1提示脑出血量增加、神经功能缺损程度加重和不良预后的可能，8-OHDG、VILIP-1可为脑出血患者病情严重程度和预后评估提供帮助。