严海东, 王 珂, 高海珍

(1. 江苏省江阴市中医院 检验科, 江苏 无锡, 214400; 2. 东南大学医学院附属江阴医院 检验科, 江苏 无锡, 214400)

强直性脊柱炎(AS)是一种主要累及骶髂关节、脊柱的慢性炎症性疾病，会导致不可逆的脊柱生理结构性破坏，而早期诊断对改善患者预后十分关键[1]。研究[2]显示，人类白细胞抗原(HLA)-B27与AS具有很强的相关性, 80%～95%的AS患者HLA-B27表达呈阳性[3]，因此HLA-B27的检测结果对该病的诊断有重要意义。目前检测HLA-B27的方法较多，其中流式细胞术(FCM)的操作简便、省时，能在短期内完成，在实验室中应用较为广泛[4]。作者在工作中发现，一些外院送检标本的荧光强度多处于临界范围，难以准确判断结果，而本院标本则较少出现此种情况。标本的运送及保存条件、放置时间及检测的时效性等均可能影响标本的荧光强度，进而影响检测结果，现分析如下。

1 资料与方法

1.1 仪器与试剂

门诊新鲜采集的EDTA-K2抗凝血标本。BD FACSCalibur流式细胞仪及相应配套试剂，操作步骤严格按照操作说明书。

1.2 方法

1.2.1 染色后放置时间对检测结果影响的实验设计: 取新鲜采集的EDTA-K2抗凝血标本共30份，采血后立即进行预处理，将血标本反复颠倒混匀后取100 μL加入60 μL HLA-B27 FITC/CD3 PE双色荧光抗体，混匀，于室温下避光孵育20 min; 随后加入4 mL红细胞裂解液，混匀后室温下避光放置10 min; 待红细胞充分裂解后, 1 500转/min离心5 min, 弃去上清液，加入Cell Wash液4 mL轻轻洗涤并再次以1 500转/min离心5 min, 弃去上清，加入1 mL Cell Wash液轻轻混匀，立即上机检测。检测完毕后，将染色好的标本立即放入4 ℃冰箱保存，在保存0、20、40、60、80、100、120、180、300 min时上机进行检测。……