潘乔丹 黄元河

1.右江民族医学院药学院，广西 百色 533000;2.右江民族医学院基础医学院，广西 百色 533000

高尿酸血症(Hyperuricemia，HUA)是由遗传因素与环境因素相互作用引起，嘌呤代谢的终产物尿酸(Uricacid，UA)在体内发生代谢障碍，出现血中尿酸浓度异常增高的代谢性疾病。HUA不仅是急性痛风性关节炎、慢性痛风石疾病及尿酸性肾病最重要的生化基础；而且还是多种血管疾病的危险因素，与多种疾病如脑卒中、高血压、糖尿病、冠心病、心力衰竭、慢性肾脏疾病等密切相关[1]。近期研究发现，当血尿酸增加，多余的尿酸会介导氧化应激，减少NO的产生, 导致内皮细胞功能紊乱；当尿酸浓度过大时候尿酸盐以结晶的形式沉积于血管壁引发炎症，最终导致血管内皮功能受损[2]。而血管内皮功能受损是冠心病、高血压、心力衰竭等疾病的重要始动因素，在心血管疾病中起重要作用[3]。近期研究发现高尿酸血症是导致心血管疾病的独立危险因素[4]。因此对高尿酸血症患者，减少血尿酸的增加，就可以较好地保护血管内皮，减少心血管疾病的发病风险。赤苍藤(ErythropalumscandensBl.)为铁青树科植物，其茎入药，化学成分主要有苏门树脂酸、桂皮酸松柏醇酯、酚类及三萜类化合物[5]，具清热利湿、祛风活血的功效，用于治疗风湿骨病、肝胆湿热、尿急、尿痛、小便不利等症[6]。本研究课题组前期实验证实了赤苍藤能抑制血尿酸的增加，对小鼠高尿酸血症模型有较好的治疗作用[7]。本实验在此基础上采用较为常用的腺嘌呤和盐酸乙胺丁醇灌胃法建立大鼠高尿酸血症(HUA)模型[8-10]，通过对血清尿酸(SUA)、一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)、肌酐、黄嘌呤氧化酶(XOD)的变化研究，探讨赤苍藤醇提物对高尿酸血症模型大鼠血管内皮功能的保护作用及可能机制。

1 材料与方法

1.1 动物 SPF级雄性SD大鼠，体重190～230 g，由右江民族医学院实验动物中心提供，动物生产许可证号为SCXK(桂)2014-0010。

1.2 试剂与药物 腺嘌呤(Aladdin公司，批号：20170724)；苯溴马隆片(常州康普药业有限公司，批号:1011013)；盐酸乙胺丁醇片(广东台城制药股份有限公司，批号:20170201)；尿酸测定试剂盒(南京建成生物工程研究所，批号：20170609);黄嘌呤氧化酶(XOD)测试盒(南京建成生物工程研究所，批号：20170725);肌酐测定试剂盒(南京建成生物工程研究所，批号:20170717);一氧化氮(NO)测试盒(南京建成生物工程研究所，批号:20170821);内皮素-1(ET-1)测试盒(上海容创生物技术有限公司，批号：20170504)；赤苍藤(Erythropalum scandens Bl.)茎粉末(广西赤苍藤生物科技有限责任公司)。

1.3 仪器 旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)；酶标仪(Thermo公司)；T6新世纪紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)。

1.4 药物溶液配制 赤苍藤醇提物：称取赤苍藤粉末100 g，用75%乙醇加热回流提取，抽滤共3次，将所得滤液混合后，浓缩干燥得浸膏。使用浸膏配制赤苍藤醇提物中剂量和低剂量组，按照生药量计算，浓度分别为200 mg/mL和100 mg/mL；腺嘌呤和盐酸乙胺丁醇混悬液：称取腺嘌呤和盐酸乙胺丁醇适量，加蒸馏水定容，配置为腺嘌呤20 mg/mL+盐酸乙胺丁醇50 mg/mL的混合溶液；苯溴马隆溶液：称取苯溴马隆适量，加生理盐水定容配置为2 mg/mL苯溴马隆溶液。

1.5 动物造模及给药 SD雄性大鼠HUA模型参考相关文献[8-10]的方法，随机抽取SD大鼠50只，分为5组，每组10只，分别为正常组、模型组、苯溴马隆组、赤苍藤醇提物中剂量组和低剂量组。除正常组外，大鼠用腺嘌呤和盐酸乙胺丁醇混悬液灌胃法造模，每只大鼠按腺嘌呤100 mg/kg+盐酸乙胺丁醇250 mg/kg灌胃；正常组和模型组大鼠分别给予3 mL 0.9%氯化钠溶液；苯溴马隆组，每只大鼠按10 mg/kg的苯溴马隆溶液灌胃。赤苍藤醇提物中剂量组和低剂量组，每只大鼠按1000 mg/kg和500 mg/kg的赤苍藤醇提物溶液灌胃；连续给药28 d。每周称体重2次，根据体重调整给药剂量。

1.6 生化指标检测 末次给药2 h后，大鼠尾静脉采集血液，取血清，采用放射免疫法测定血清ET-l的含量，采用紫外分析法测定血清尿酸(SUA)、黄嘌呤氧化酶(XOD)、NO、肌酐的含量，均按试剂盒说明检测。

2 结果

2.1 对高尿酸血症模型大鼠SUA、XOD和血清肌酐的影响 与正常组比较，模型组SUA、XOD、肌酐水平显著升高(P<0.05)；与模型组比较，赤苍藤醇提物中剂量组和低剂量组大鼠血清SUA含量、XOD活力和肌酐含量均明显降低(P<0.05)，苯溴马隆组SUA含量明显降低(P<0.05)。见表1。

表1 赤苍藤醇提物对HUA大鼠SUA、XOD和肌酐水平的影响

2.2 对高尿酸血症模型大鼠ET-1、NO含量的影响 与正常组比较，模型组ET-l 含量显著升高(P<0.05)，NO含量明显降低(P<0.05)。与模型组相比，赤苍藤醇提物中剂量组和低剂量组大鼠血清ET-1含量均明显降低(P<0.05，P<0.05)，血清NO含量均显著升高(P<0.05)，苯溴马隆组大鼠血清ET-1含量明显降低(P<0.05)。见表2。

表2 赤苍藤醇提物对HUA大鼠血清ET-1、NO含量的影响

3 讨论

在正常生理活动时，血管内皮具有血管屏障、内分泌功能、抗血栓、调节血管张力等多种生理功能。血管的张力是由血管扩张物质和血管收缩物质来调节。NO是血管内皮释放的重要血管舒张因子，ET-1是血管内皮细胞分泌的血管收缩因子[11]。当NO和ET-1处于不平衡状态，导致血管内皮功能障碍，引发心血管疾病和动脉粥样硬化[12]。尿酸浓度增高时，部分尿酸盐形成结晶沉积于管壁，造成血管内皮的损伤，还能介导血管炎性反应和氧化应激反应，致使NO和ET-1不平衡，导致血管收缩功能亢进[13]；尿酸和尿酸盐结晶还会在肾脏沉积，引起氧化应激、炎性反应等，导致肾脏功能受损[14]。

本实验选择NO、ET-1作为评价血管内皮功能的指标，选择肌酐作为评价肾脏功能的指标。实验结果显示，与模型组相比，苯溴马隆能显著降低SUA的含量(P<0.05)，但是对高尿酸血症导致的血清肌酐含量升高和NO水平减低的抑制作用不显著，说明苯溴马隆可以较好地降低血尿酸，但对血管内皮的损伤和肾损伤保护作用不显著；与模型组相比，赤苍藤醇提物能够显著抑制XOD黄嘌呤氧化酶的活性(P<0.05)，降低SUA的含量(P<0.05)，显著抑制高尿酸血症导致肌酐和ET-l 含量升高以及NO水平降低，说明赤苍藤醇提物对高尿酸血症导致的血管内皮损伤和肾损伤具有较好的保护作用。