谷叶　黄和飞

摘 要：为提升黄曲霉毒素（AFT）检测的灵敏度，采用液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）法检测食品内4种AFT（B1、B2、G1和G2）。发现4种组分于5 min内整体分离，且该方法具有良好的线性相关性，B1、B2、G1和G2的检出限依次是0.11、0.009、0.012 μg/㎏和0.008 μg/㎏，加标回收率均值为80.0%～94.5%，RSD<5.0%。用LC-MS/MS检测食品AFT，有速度快、灵敏度高、精确可靠等优势，有推广价值。

关键词：食品;黄曲霉毒素;液相色谱串联质谱法

AFT，即由黄曲霉与寄生曲霉等真菌代谢后形成的一种毒害性真菌霉素。AFT及其衍生物有20余种，其中B1、B2、G1与G2在自然界内广泛分布，其基本结构均由一个呋喃环与一个香豆素组成，前者是毒素的基础结构，后者和AFT的致癌性密切相关，且对前者的毒性有加强作用[1]。因为AFT对机体健康造成的危害较大，故而多个国家政府机关与有关组织陆续拟定了食品内AFT的检测分离方法，和其他检测方法相比，LC-MS/MS法分离能力强、灵敏度高，能实现对多种化合物的定性定量分析，本文主要用其检测食品中4种AFT（B1、B2、G1與G2），具体如下。

1 材料和方法

1.1 材料与试剂

从市面上采购花生、玉米、燕麦片等。制备AFT的B1、B2、G1与G2混合标准液（前两者的质量浓度均为1 μg/mL，后两者均为0.3 μg/mL）。乙醇、甲醇均为色谱纯，甲酸为分析纯，超纯水。

1.2 仪器和设备

选用6430三重四极杆液质联用系统及相关配套设施检测AFT，还有净化柱、电子天平、超声波清洗器与超纯水仪等设施。

1.3仪器参数

1.3.1 色谱条件

选Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18柱（4.6 mm×50 mm，1.8 μm）作为色谱柱;流动相为0.1%甲酸-甲醇（3∶2）;设定流速0.4 mL/min;柱体温度35 ℃;进样量为5 μL。

1.3.2 质谱条件

选取喷雾电离源作为离子源，基于正离子模式加以扫描;干燥气流速、温度依次为12 mL/min、345 ℃;雾化气压力为50 psi;毛细管电压4 000 V;质量扫查范畴100～500 m/z。

4种AFT的MRM扫描参数见表1。

1.4 处理试样

分别量取25 g试样，将其依次放入到容积为250 mL的锥形瓶内，而后把100 mL乙腈-水溶液加入其中，连续快速搅拌3 min，将如上制得的混合液通过定性滤纸与Mycosep 226真菌毒素净化柱，以获得净化液，提取适量通过0.22 μm滤膜，采集待测。

1.5 线性范围和检测限

把标准样品液稀释为数个不同浓度梯度，按浓度由低至高顺序进样5 μL，横、纵坐标分别设定为进样浓度、峰面积，进行线性回归分析。

1.6 精密度和回收率试验

对各试样反复进行5次进样，检测到各组分对应的峰面积，测算相对标准偏差（RSD），以评估方法的精密度。为检测该方法的回收率，提取3份试样，依次添加体积不同的标准液，测算出加标回收率。

2 结果和分析

当甲醇和水相比例为3∶2时，4种组分于5 min内陆续出峰，取得了最佳的分离效果[2]。

取用浓度存在差异的标准液，依照设定的色谱、质谱条件进样，基于峰面积（y）与试样含量（x）绘制标准曲线，获得相应的线性方程与有关系数，并测算出检出限与定量限。具体见表2。

依照1.6方法开展精密度与回收率试验，测算RSD，精密度检测结果见表3[3]。

分析表2内的数据后，发现RSD均<5.0%。进行回收率试验，发现样品的回收率均在80.0%～94.5%。综合各种数据信息后，认为该检测方法的精密度与回收率均较好。

3 讨论

本实验研究中建立了LC-MS/MS法检测食品内AFT，使用甲醇和水等进行洗脱，于质谱正离子模式下进行监测，4种组分于5 min内整体分离，B1、B2、G1与G2的检出限依次是0.11、0.009、0.012 μg/㎏与0.008 μg/㎏，加标回收率均值为80.0～94.5%，RSD<5.0%，均符合相关限量规范要求。LC-MS/MS检测食品内AFT，有过程快速、灵敏度高、精确可靠等诸多优势，值得推广。

参考文献

[1]董靖，张潇，刘越，等.2种高效液相色谱仪测定芝麻酱中黄曲霉毒素B1的不确定度评定[J].食品安全质量检测学报，2020，11（7）：2190-2196.

[2]陈梦，邹小龙，范蕾，等.高效液相色谱法测定牛奶中黄曲霉毒素M1含量的不确定度评定[J].分析测试技术与仪器，2020，26（1）：71-75.

[3]于建玉，任合松.QuEChERS-HPLC快速测定牛奶中的黄曲霉毒素M1[J].化学工程师，2020，34（3）：29-31.