张军 董雅璐

[摘要] 目的 探索靶向间皮素（MSLN）嵌合抗原受体改造的NK-92细胞在胃癌中的抗肿瘤活性。 方法 构建靶向MSLN的二代嵌合抗原受体，利用慢病毒转染的方式将其导入NK-92细胞中得到MSLN CAR-NK-92细胞。通过免疫组化分析、流式细胞术及Western blot实验检测人胃癌肿瘤组织、人胃癌细胞中MSLN的表达情况。通过体外激活及体内肿瘤抑制实验研究CAR-NK-92细胞的特异性识别能力和抗肿瘤活性。 结果 人胃癌肿瘤组织及肿瘤细胞中高表达MSLN。CAR-NK-92细胞可以特异性激活并裂解肿瘤细胞。与转染空载体的NK-92细胞比较，CAR-NK-92细胞可以明显抑制胃癌肿瘤的生长（P < 0.01）。 结论 构建的靶向MSLN的CAR-NK-92在体内外都展现出显著的特异性杀伤MSLN+的胃癌细胞的活性，将有可能在胃癌的治疗中提供新的思路。

[关键词] 胃癌;间皮素;NK-92细胞;免疫治疗

[中图分类号] R730.51          [文献标识码] A          [文章编号] 1673-7210（2020）07（a）-0011-05

[Abstract] Objective To explore the antitumor activity of NK-92 cells modified with chimeric antigen receptor targeting mesothelin （MSLN） in gastric cancer. Methods The second generation chimeric antigen receptor targeting MSLN was constructed and transfected into NK-92 cells by lentivirus transfection to obtain MSLN CAR-NK-92 cells. The expression of MSLN in human gastric cancer tissues and human gastric cancer cells was detected by immunohistochemistry， flow cytometry and Western blot. The specific recognition ability and the anti-tumor activity of CAR-NK-92 cells were studied through in vitro activation and in vivo tumor inhibition experiments. Results MSLN was highly expressed in human gastric cancer tissue and tumor cells. CAR-NK-92 cells could specifically activate and lyse tumor cells. Compared with NK-92 cells transfected with an empty vector， CAR-NK-92 cells can significantly inhibited the growth of gastric cancer （P < 0.01）. Conclusion CAR-NK-92 targeting MSLN has shown significant activity in vivo and in vitro to kill gastric cancer cells specific to MSLN+， which may provide a new idea in the treatment of gastric cancer.

[Key words] Gastric cancer; Mesothelin; NK-92 cell; Immunotherapy

胃癌是全球癌症相关死亡的第三大原因，每年约有100万新诊断病例[1-2]。CAR修饰的淋巴细胞是一种很有前途的免疫治疗方法[3]。目前T细胞、NK细胞代表了另一种可以用CAR改造的高度有效的效应细胞类型，同种异体NK细胞過继转移安全性高[4]，但培养相对困难[5]。NK-92细胞是目前比较理想的原代NK细胞替代品[6]，其安全性和有效性已被证实[7]。此外，一项早期的临床试验证实输注经过辐射的NK-92细胞具有良好的耐受性，并且部分接受治疗的癌症患者得到了长时间的疾病缓解[8]，这使得NK-92细胞成为CAR工程化的一个极具希望的选择[9]。

本研究首先设计了靶向间皮素（MSLN）的二代CAR来改造NK-92细胞，以探究这种MSLN CAR-NK-92细胞是否会对胃癌产生显著的抗肿瘤活性。随后选择在实体瘤中高表达MSLN作为靶标[10-11]。结果发现靶向MSLN的CAR-NK-92细胞可以在体外充分激活并裂解MSLN+胃癌细胞。……