王 迪, 徐 楠, 郭家妍, 宋 跃, 唐明睿

(中国医科大学附属第一医院 整形外科, 辽宁 沈阳, 110001)

黑色素瘤是一种极具侵袭性的皮肤恶性肿瘤，其易发生淋巴和血行转移，治疗手段有限且预后极差[1-2]。小檗碱是一种中药提取物，临床上多用于治疗胃肠道疾病。近年来，黄连素已被证实具有抑制多种癌症细胞增殖、促使癌症细胞凋亡的作用，如骨肉瘤细胞[3]、前列腺癌细胞[4]、肝癌细胞[5]和结肠癌细胞[6]。程序性细胞死亡蛋白4(PDCD4)是一种翻译抑制蛋白，可在体内外抑制肿瘤细胞增殖与侵袭[7-8]。1995年, Shibahara K等[9]在凋亡小鼠细胞系中发现了PDCD4基因。人类的PDCD4基因定位于染色体10q24, 互补DNA(cDNA)全长约3.5 kb, 其中编码区约1.4 kb[10]。PDCD4编码蛋白约含469个氨基酸，包含1个N端功能域和2个串联MA3结构域。突变分析及核磁共振波谱(NMR)分析[11-12]表明, PDCD4的2个MA3结构域均可与真核翻译起始因子4A(eIF4A)结合，抑制核糖体复合物的形成，抑制RNA解旋酶活性，从而抑制mRNA的翻译及蛋白质的合成，进而抑制肿瘤细胞增殖，促使肿瘤细胞凋亡。本研究探讨小檗碱通过上调PDCD4的表达来抑制黑色素瘤细胞系B16的增殖及促细胞凋亡机制，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 细胞系和细胞培养

黑色素瘤细胞系B16购自美国典型培养物保藏中心(ATCC, Bethesda, MD)。该细胞系培养于含有10%胎牛血清及抗生素(100 U/mL青霉素和100 μg/mL链霉素)的Dulbecco′s Modified Eagle′s培养基(Hyclone, Logan, UT), 并置于37 ℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

1.2 细胞活力测定

将黑色素瘤细胞系B16细胞按每孔2×103个细胞密度接种于96孔板中，并在37 ℃下与阴性对照[二甲基亚砜(DMSO)]及1、10、100 μmol/L小檗碱共培养48 h。小檗碱处理后48 h, 更换培养基并加入CCK-8溶液(碧云天)，继续在37 ℃下再孵育4 h。……