李兴江，王鹏宇，宋妍婕，冯玉宽

(牡丹江医学院，黑龙江 牡丹江 157011)

当前，肺癌仍是全球发病率和死亡率最高的恶性肿瘤，成为危及健康和生命的主要恶性疾病之一[1]。非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)为最常见的肺癌类型，约占肺癌人群的 85%，主要包括肺腺癌及鳞癌两大病理类型[2]。多药耐药相关蛋白1(Multidrug Resistance-associated Protein 1: coded by ABCC1,MRP1/ABCC1)是一种ATP转运蛋白，它利用ATP水解的能量实现底物在细胞内外的跨膜转运，是肿瘤多药耐药(multi-drug resistanc-e，MDR)的主要靶标。ABCC1在多种肿瘤中高表达，例如肺癌、胰腺癌、结肠癌、肾癌和膀胱癌[3-7]。虽然ABCC1介导的肿瘤耐药研究有较多报道，但是ABCC1在肿瘤细胞中的高表达对肿瘤细胞恶性表型的影响，特别是ABCC1对非小细胞肺癌恶性转化的能力的影响及其表达失调控的机制仍不确切。因此，评估ABCC1对非小细胞肺癌转化能力影响具有重要意义。

1 材料与方法

1.1 细胞与试剂人正常肺上皮细胞(BEAS-2B)购于中科院上海生物化学与细胞生物学研究所。EGM培养基、胎牛血清从赛默飞世尔科技(中国)有限公司购买。pcDNA-copGFP慢病毒表达载体和Lipofectamine TM 2000 Reagent试剂盒购自北京索莱宝公司。SYBR PrimeScriptTM RT-PCR试剂盒购自宝生物工程公司。引物、抗体购于锐博公司。CCK-8购自于贝博公司，Matrigel基质胶购于碧迪公司，Transwell小室于康宁公司购买。

1.2 细胞培养与慢病毒转染将从4℃冰箱中取出的EGM培养基与10% FBS混合制成完全培养基，并将恒温细胞培养箱调节为37℃、CO2浓度调为5%，培养细胞。取对数生长期的细胞用于实验，按每孔3×105细胞接种于6孔板中。用针对人ABCC1 CDS区的PCR引物扩增PCR产物，并克隆至慢病毒穿梭质粒构建表达载体pcDH-ABCC1。……