刘长兵，胡惠贞，黄海良

(1.宣城职业技术学院医护学院，安徽 宣城 242000;2.安徽卫生健康职业学院基础教学部，安徽 池州 247100；3.安徽医科大学生物化学与分子生物学教研室，安徽 合肥 230032)

肝癌在全球癌症发病率中居于第六位，其在癌症死亡率中高居第四位[1]。肿瘤细胞的转移是导致患者预后不佳和复发率高的最主要因素，该过程涉及很多内外因素[2]。因此，深入探寻影响及决定肝癌早期转移的分子机制对肝癌的临床治疗具有重要作用。

MicroRNAs(miRNAs)属于内源性非编码RNA，主要在转录后或翻译水平靶向调控目标基因表达而发挥生物学功能[3-4]。研究证实，MiR-22的表达失调与前列腺癌、乳腺癌、胆管癌、肝癌和多发性骨髓瘤均具有相关性[5-6]。然而，miR-22失调在肿瘤发生发展中的作用及机制仍然难以捉摸。因此，我们通过构建miR-22过表达载体并进一步研究miR-22对肝癌的影响，为深入研究其生物学功能奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料dulbecco's modified eagle medium(DMEM)细胞培养液、胎牛血清(美国Gibico公司)；RNA提取试剂盒、反转录试剂盒(Thermo Fisher公司)；Real-time PCR试剂盒(宝日医生物技术(北京)有限公司)；GAPDH、Bcl-2、Bax、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin和β-catenin抗体(美国Santa Cruz公司)；蛋白提取及定量试剂盒、CCK8细胞增殖检测试剂盒(上海碧云天生物技术研究所)；ECL检测试剂盒(美国Affinity公司)；miR-22-3p过表达质粒(上海吉凯基因化学技术有限公司)；Li-7细胞株(中科院上海细胞库)。

1.2 方法

1.2.1 miR-22-3p过表达细胞株建立 Li-7细胞置于37℃，5%CO2恒温细胞培养箱中进行培养，隔天换液、观察细胞状态，待细胞铺满培养瓶时进行传代。按1×106/mL的标准将细胞接种于6孔培养板，并按照lipofectamine 3000操作说明进行细胞转染，实验设置正常对照组(N)、阴性对照组(GV251/NC)和miR-22-3p过表达组(GV251/miR-22-3p)。……