杜 攀，李 培，董 清，庞 博

（山东省聊城市食品药品检验检测中心，山东 聊城 252000）

四消丸由大黄（酒炒）、猪牙皂（炒）、牵牛子（炒）、牵牛子、香附、槟榔、五灵脂（醋炒）组方，具有消水、消痰、消食、消气、导滞通便的功效，用于治疗气食痰水、停积不化、胸脘饱闷、腹胀疼痛、大便秘结。槟榔有效成分氢溴酸槟榔碱可使胃肠平滑肌张力升高，增加肠蠕动，使消化液分泌旺盛，增加食欲［1］，能增强四消丸消食、消气的药效，因此测定四消丸中氢溴酸槟榔碱的含量具有非常重要的意义。目前执行的四消丸检验标准中无氢溴酸槟榔碱含量测定项，也无槟榔药材的薄层鉴别［2-3］。在山东省开展的中成药检验专项工作中，发现各生产厂家对四消丸的中药材投料存在差异，甚至存在槟榔未投料的情况。为了更好地进行质量控制，本研究中采用高效液相色谱（HPLC）法［4-8］对5 个厂家9 批四消丸中的氢溴酸槟榔碱含量进行测定。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 1200SL 型高效液相色谱仪（美国Agilent 公司）；BT125D 型双量程电子分析天平（北京Sartorius 公司，精度为0.1 mg）；pHS-3C 型精密pH 计（上海雷磁仪器厂）；微孔滤膜（0.22 μm，美国津腾公司）。

1.2 试药

四消丸（山东孔圣堂制药有限公司，批号分别为1703088，1702035，1701074；河南明善堂药业有限公司，批号分别为170402，170105；河南康华药业股份有限公司，批号分别为17010101，17010302；山西华康药业股份有限公司，批号为20170204；河南润弘本草制药有限公司，批号为170403）。氢溴酸槟榔碱（中国食品药品检定研究院，批号为111684-201602，供含量测定用，纯度 为99.8% ）。乙 腈（瑞 典Oceanpak 公 司，批 号 为16100115G001，纯度不低于99.9%）；乙醚（国药集团化学试剂有限公司，批号为20160419，纯度不低于99.7%）；磷酸（天津市科密欧化学试剂有限公司，批号为20170313，纯度不低于85%）；氨水（莱阳经济技术开发区精细化工厂，批号为20150528，纯度为25% ～28% ）；碳酸钠（天津市大茂化学试剂厂，批号为20160217，纯度大于99%）；碳酸氢钠（天津市大茂化学试剂厂，批号为20160830，纯度大于99%）；均为分析纯。自制超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Ultimate XB -SCX 柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-磷酸溶液（2→1 000，浓氨试液调节pH 至3.8，55 ∶45，V/ V）；检测波长：215 nm；流速：1.0 mL/min；柱温：30 ℃；进样量：10 μL［9-12］。

2.2 溶液制备

取氢溴酸槟榔碱对照品适量，精密称定，加流动相制成质量浓度为0.1 mg/mL 的溶液，即得对照品溶液。取样品粉末约0.3 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加乙醚50 mL，再加碳酸盐缓冲液3 mL，放置30 min，时时振摇，加热回流30 min，分取乙醚液，加入盛有磷酸溶液（5→1 000）1 mL 的蒸发皿中；残渣加乙醚，加热回流提取2 次（30 mL，20 mL），每次15 min，合并乙醚液，置同一蒸发皿中，挥去乙醚，残渣加50%乙腈溶液溶解，转移至25 mL 容量瓶中，加50%乙腈至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

2.3 方法学考察

专属性试验：按处方比例，称取不含槟榔的其余药材，按处方工艺制成细粉，过5 号筛［13］，取2.072 g，作为阴性样品，按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液，依法进样测定。结果在对照品溶液色谱氢溴酸槟榔碱（RT=36.5）位置，供试品溶液和阳性对照品溶液均检出相应色谱峰，而阴性对照无干扰。色谱图见图1，表明方法专属性较好。

线性关系考察：取氢溴酸槟榔碱对照品0.010 44 g，精密称定，加流动相制成含氢溴酸槟榔碱208.8 μg/mL的 溶液，进行倍比稀释，得208.8，167.04，125.28，104.40，83.52，52.50，20.88，10.44 μg /mL 系列质量浓度的对照品溶液。分别取10μL，按拟订色谱条件进样测定，记录峰面积，以质量浓度（X，μg /mL）为横坐标、峰面积（Y）为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程Y=23.201X-5.888（R2=0.999 7）。结果表明，氢溴酸槟榔碱质量浓度在10.44 ～208.80 μg /mL 范围内与峰面积线性关系良好［14-15］。

精密度试验：取线性关系考察项下质量浓度为104.4 μg /mL 的对照品溶液，重复进样5 次，每次10 μL，记录峰面积。结果的RSD为0.40%（n=5），表明仪器精密度良好。

图1 高效液相色谱图

重复性试验：称取同一批（批号为1703088）样品6 份，精密称定，依法制备供试品溶液，按拟订色谱条件进样测定。结果含量的RSD为1.82%（n=6），表明方法重复性良好。

表1 氢溴酸槟榔碱加样回收试验结果（ n=6）

稳定性试验：精密吸取重复性试验项下供试品溶液，分别于0，2，6，12，20，24 h 时进样测定。结果氢溴酸槟榔碱峰面积积分值的RSD为0.14%（n=6），表明供试品溶液在24 h 内基本稳定。

加样回收试验：取已知含量的同一批（批号为1703088）样品6 份，精密称定，同时精密加入质量浓度为104.4 μg /mL 的对照品溶液5 mL，依法制备供试品溶液，按拟订色谱条件进样测定，计算回收率。结果见表1。

2.4 样品含量测定

取5 个厂家每个批号的样品各2 份，精密称定，依法制备供试品溶液，按拟订色谱条件进样测定。结果见表2。

表2 各批样品中氢溴酸槟榔碱含量测定结果

2.5 阳性样品含量测定

按处方比例称取各种药材，按工艺方法制成细粉，过5 号筛，即得阳性样品。取5 份阳性样品，精密称定，依法制备供试品溶液方法制备阳性样品溶液，依法进样测定。结果阳性样品中氢溴酸槟榔碱的平均含量为0.312 mg/g。

3 讨论

本研究中采用HPLC 法测定四消丸中氢溴酸槟榔碱的含量，方法简便、准确度高、重复性好，能用于准确检测四消丸中槟榔碱的含量，可用于控制四消丸的产品质量。由样品含量测定结果可见，目前生产四消丸的厂家普遍存在槟榔投料低于处方规定量的现象，建议建立测定四消丸中氢溴酸槟榔碱含量的HPLC 法，增加槟榔药材的薄层色谱鉴别项目，提高药品质量评价标准。