周琳 杨明理 曾春平* 龙涛 樊秀云

1.广州医科大学附属第五医院内分泌科，广州医科大学第五临床学院，广东 广州 5107002.遵义医科大学医学遗传学教研室，贵州 遵义 563000

骨重建包括骨形成和骨吸收两种相互平衡的过程，分别由成骨细胞和破骨细胞调控[1]。破骨细胞的过度作用导致骨吸收增多，打破骨形成和骨吸收的平衡，将引起如骨质疏松症等疾病，破骨细胞在这类疾病中的作用非常关键[2]。目前发现，各型糖尿病使骨质疏松症发病风险增高[3]。运用降糖药物降低血糖后，骨折风险可明显降低，这些降糖药物中，二甲双胍降低骨折风险最为明显，且矫正了降糖的作用后，二甲双胍仍具有降低骨折风险的作用[4]。目前的研究表明，二甲双胍通过促进成骨细胞分化[5-7]，增强成骨细胞的功能来增加骨密度，然而二甲双胍对破骨细胞的作用罕见有文献报道。本课题组研究盐酸二甲双胍对破骨细胞分化及功能的作用，从而为骨质疏松症提供潜在的治疗手段。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

α-MEM 培养基和胎牛血清购自澳大利亚 TRACE 公司，RANKL、MCSF、TRAP试剂盒购自北京索莱宝公司，盐酸二甲双胍(纯度>98%)购自美国Sigma公司。辣根过氧化物酶标记羊抗小鼠二抗、辣根过氧化物酶标记羊抗兔二抗购自美国santo cruz公司。抗ERK抗体购自美国cell signaling公司。骨吸收板购自美国BD公司。TRIZOL购买于美国invitrogen公司，Real-time PCR反应试剂SYBR®Premix Ex Taq购于大连TaKaRa。

1.2 细胞培养

分离取出C57BL/6小鼠股骨的骨髓巨噬细胞种于75 cm2的培养瓶中。培养瓶内含10 mL 10%胎牛血清的α-MEM培养基和25 ng/mL的巨噬细胞集落刺激因子(MCSF)。于……