刘静娟，李 越，何 谦，周晓艳，尹 阳，肖姗姗

（1.西安交通大学第二附属医院检验科，西安 710004；2.西安交通大学附属儿童医院输血科，西安 710003）

在我国，RhD 阴性血型属于稀有血型，在汉族人群中所占比例约为0.2%～0.5%。在临床输血治疗中，Rh 血型系统是仅次于ABO 血型系统的最重要和最富有多态性的一个系统。有关汉族献血人群Rh 血型表型分布特征常有报道[1-2]，但迄今为止，对临床RhD 阴性患者的Rh 表型分布特征的研究较少。了解临床RhD 阴性患者的血型分布特征，将有利于供血机构为临床预估及时提供相匹配血液，有效的预防和减少患者抗Rh 类抗体的产生。在临床输血治疗中，Rh 系统抗原抗体不匹配可引起溶血性输血反应、新生儿溶血病及自身免疫性溶血性贫血。为了使RhD 阴性儿童输血治疗中能及时安全合理地用血，本研究对在医院就诊的儿童RhD阴性表型进行筛选，并对其血型分布特点进行了研究。

1 材料与方法

1.1 研究对象 收集2018年9月～2019年4月，在西安交通大学附属儿童医院门诊及住院就诊的59 582 例儿童血细胞检测标本，经初筛为RhD 阴性的血样标本，排除一人多次就诊患儿共收集标本269 例。其中，男性148 例，女性121 例，年龄1～15 岁。

1.2 试剂与仪器 ABO 血型鉴定正定型用抗A 抗B 血型定型试剂，反定型用人ABO 血型反定型试剂（单克隆抗体，上海血液生物有限责任公司）。RhD 血型初筛使用抗D（IgM+IgD）血型定型试剂[（单克隆抗体，英国Millipore(UK)Limited）]。对于初筛阴性者，使用抗人球蛋白试验确认，以排除弱D抗原（Du）。Rh 血型抗D 抗原确认试剂使用IgG-D 试剂（上海血液生物医药有限公司），抗D（IgM+IgG）血型定型试剂（单克隆抗体）来自英国Millipore(UK)Limited 公司。Ig-M 抗-C，抗-c，抗-E，抗-e 为上海血液生物有限公司产品。抗人球蛋白（抗IgG，C3d）生产于上海血液生物医药有限公司。主要仪器为Baso2005-1 离心机，himac MC450 全自动血细胞洗涤离心机，恒温箱。

1.3 研究方法 采集患儿静脉血2ml，EDTA-K2抗凝。ABO 血型、Rh 血型均用试管法，对患儿标本用IgM/IgG-D 进行初筛，对初筛标本用两种不同厂家的抗-D 试剂用间接抗人球蛋白法实验确认。配3 ～5g/dl 的红细胞悬液取50μl 分别加入两只试管，分别加IgM/IgG-D，IgG-D 1 滴置37℃水浴30min，MC450 全自动血细胞洗涤离心机洗涤3 次，加入50μl 抗人球蛋白试剂离心观察结果。Rh 表型用试管法检测，配3 ～5g/dl 的红细胞悬液留用，加Ig-M 型抗-C，抗-c，抗-E，抗-e 离心观察结果。

1.4 统计学分析 RhD 阴性患者的表型分布比较采用Pearson χ2检验方法，使用SPSS 18.0 软件进行分析，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 RhD 阴性筛查结果 在59 582 例儿童患者中经试管法及间接抗人球蛋白法检测确定了267例RhD 阴性（初筛269 例中排除2 例Du 型），RhD 阴性频率约为0.448%（4.48‰）；在267 例RhD 阴性儿童患者中，女性占44.94%，男性占55.06%。

2.2 RhD 阴性儿童患者在ABO 血型中的分布 在267 例确定的RhD 阴性儿童患者中，其在ABO 血型系统内的分布情况见表1。不同性别儿童在ABO血型系统间的分布比较，其差异有统计学意义（Pearson χ2检验，χ2=10.720，P=0.013）。在B 型、AB 型RhD 阴性患者中，男性比例显著高于女性。在A 型RhD 阴性儿童患者中，女性比例显著高于男性。

表1 RhD 阴性儿童患者在ABO 血型中的分布

2.3 RhD 阴性儿童患者在Rh 血型系统中的表型分布 继续深入分析从2019年1～4月期间就诊的儿童患者，共有91 例确认的RhD 阴性标本，其中，共检出6 种Rh 表型（见表2），分别为：ccee 表型42 例（46.15%），Ccee 表型37例（40.66%），ccEe 表型6 例（6.59%），CCee表型4 例（4.40%），CcEe 表型1 例（1.10%），ccEE 表型1 例（1.10%），各表型间的分布较不平衡，其中ccee 表型最高，Ccee 次之，而CcEe和ccEE 的表型频率最低。

3 讨论

ABO 血型和Rh 血型系统被认为是两个最重要的血型系统，其血型抗原普遍存在于红细胞、血小板、内皮细胞等组织细胞中。Rh 血型系统，作为人类已知最复杂多形的血型之一[3]，其与临床输血密切相关的主要有5 个抗原，可按免疫强弱顺序依次为D＞E＞c＞C＞e，临床上根据红细胞D 抗原的有无，可分类红细胞为Rh 阳性或Rh 阴性。Rh 血型系统的D 抗原的抗原性和重要性仅次于ABO 抗原。同源基因RHD 和RHCE 位于1 号染色体，可编码Rh 血型系统D，C，E 抗原。除了其在输血医学中的重要作用外，Rh 血型抗原，特别是D 抗原，与最严重的胎儿和新生儿溶血性疾病（HDFN）密切相关[4-5]。

近年来，随着临床治疗的需要和输血治疗的增加，人们对输血越来越重视，对科学且安全的输血要求也越来越高，尤其对儿童输血更加谨慎。目前，临床输血采用ABO 和RhD 配合型输注，而Rh 血型系统的其他抗原采用随机性输注。国家二胎政策的放开，新生儿溶血病的发病率明显提高，儿科疑难配血也越来越多，Rh 血型系统新生儿溶血患儿明显增多，然而目前对Rh 血型系统人群的分布特征的描述一般均来自于献血人群，而对临床Rh 阴性患者人群的了解较少，对我国儿童Rh 阴性人群的研究未见相关报道[6]。因此，在本研究中，我们从2018年9月～2019年4月在西安交通大学附属儿童医院门诊及住院就诊的59 582 例儿童血细胞检测标本中，调查了确认的267 例RhD 阴性儿童患者的ABO 血型分布情况，其中，在B 型RhD 阴性儿童患者，男性比例显著高于女性；在A 型RhD阴性儿童患者，女性比例显著高于男性。对女性人群，强调进一步的Rh 表型检测的临床意义将更为重要，有利于尽可能避免产生抗Rh C/E 类抗体，从而减少对女性潜在的妊娠生育的影响。

进一步选择近期（2019年1～4月）就诊的总计91 例RhD 阴性儿童患者，分析研究其在Rh 血型系统中的表型分布。RhD 阴性人群理论上应该存在9 种Rh 表型，但在本研究中我们仅发现6 种表型，CcEE，CCEe 和CCEE 表型未在本研究中检测发现，这与我国相关研究结果是相似的[7-8]。从这些相关文献报道中也可见，CCEe 和CcEE 的表型频率极低，CCEE 表型较罕见。在本研究中，ccee 和Ccee表型最为常见，分布频率分别为46.15%（42/91），40.66%（37/91），ccEe 和CCee 少见，而CcEe 和ccEE 的表型频率最低。因此，Rh 血型抗原在RhD阴性儿童患者中的分布也存在一定的差异性，了解其分布差异性对于临床儿童输血工作具有重要参考作用。徐朴等[6]人报道，在湖北汉族RhD 阴性住院患者中Ccee 表型频率为27.6%。张薇薇等[7]人研究西安地区RhD 阴性献血者抗原分布后，报道Ccee 表型频率为28.5%。本研究Ccee 表型明显高于相关研究结果，这种差异可能与研究人群的例数或儿童患者的Rh 阴性表型分布特征相关。其余ccEe 等表型分布与南方地区的相关研究对比，未见地域分布差异[8]。

总而言之，本地区RhD 阴性儿童患者人群的Rh 表型分布是不平衡的，因此在临床输血中不能只单纯地进行D 抗原检测，进一步强调对抗-C，抗-c，抗-E 和抗-e 抗体分型是极其重要的。在未来的工作中，我们还将进一步研究儿童患者中D变异型。本研究结果对于补充我国儿童人群的Rh血型分布特征的相关知识、临床预估并及时预备合适的RhD 阴性血液、保证儿童输血安全具有重要意义。