王亚欣,康艳梅,方心灵,刘国乾,张 君

(广东科贸职业学院,广东广州 510430)

猪流行性腹泻病毒（PEDV）可导致所有年龄段的猪出现急性或亚急性消化道疾病。猪流行性腹泻（PED）首次在英国报道，之后几十年对中国、韩国和越南在内的亚洲国家养猪业造成巨大的经济损失。此外，2013年4月PED 在美国爆发，北美的养猪户也遭受了毁灭性的经济损失（陈兵，2014）。猪在感染PEDV 后的主要临床症状包括急性腹泻、呕吐、体重减轻和脱水。此外，与年龄较大的仔猪相比，哺乳仔猪的发病率更高，感染2 ～4 d 出现死亡，死亡率高于50%（陈兵，2014）。而目前的防治药物效果不够理想，因此，寻找预防或治疗PED 的有效药物具有重要意义。在中国，草药多年来一直被用作抗菌剂，如鱼腥草提取物对单纯疱疹病毒1 型（HSV-1）、流感病毒、人类免疫缺陷病毒1 型（HIV-1）和冠状病毒都有疗效（Lu 等，2006）。黄连中含有黄连素，黄连素是黄连的活性成分之一，具有较强的抗病毒、抑菌活性。此外，蒲公英、板蓝根、黄芪和太子参等也具有抗菌、抗病毒的特性（Kim 等，2008）。因此，以上中草药对治疗PED 具有潜在功能。因此，本研究旨在研究中草药混合提取物对感染PEDV仔猪的治疗效果，以及对仔猪生长性能和肠道形态的影响。

1 材料与方法

1.1 试验材料 试验猪选自四川某猪场患病仔猪。

复合中草药制剂由鱼腥草、黄连、蒲公英、板蓝根、黄芪和太子参提取物等比例组成，所有中草药均购买自重庆某中药材公司。

1.2 试验设计 2019年3月23 日某猪场产下仔猪139 头，3月25 日开始个别化猪有拉稀症状，病猪精神沉郁，被毛粗乱，体温39.5℃；3月26日部分仔猪出现呕吐，急性腹泻，排黄色和黄白色粪便，粪便粘附于肛口附近，仔猪扎堆。经统计共有101 头出现腹泻症状，发病率为71.9%。之后检测仔猪患PED 情况，在阳性结果中选取100 只患病仔猪，随机分为 4 组，试验 2、3、4 组分别添加0.4、0.8、1.2 g 的中草药制剂于 5 mL 人工乳中进行灌服，试验1 组灌服等体积人工乳，连续处理5 d，之后观察3 d。试验期间乳猪自由饮水和采食人工乳，试验所用人工乳主要的营养含量见表1。

表1 人工乳营养水平

1.3 样品采集及指标测定

1.3.1 患病仔猪腹泻诊断 PEDV 连续处理2 d 后，用拭子采集仔猪直肠粪便，用RT-PCR 试剂盒方法检测PEDV 抗原，具体方法参考王风等（2012）的研究。所用PEDV 引物序列为F：5’-gggcgcctgtatagagttta-3’，5’-agaccaccaagaa tgtgtcc-3’。检测结果为阳性，并伴随腹泻、精神不振等PED 典型症状的仔猪诊断为PEDV 感染成功。

1.3.2 患病仔猪使用中药制剂后情况统计 中草药制剂治疗后，观察仔猪精神状态、腹泻等情况，治疗后停止腹泻，精神及采食恢复，并且在观察期内未复发的仔猪判断为治愈。记录死亡和治愈数，计算治愈率及死亡率。

1.3.3 患病仔猪使用中药制剂后生长性能统计分别在中草药处理前和处理结束时称量仔猪的空腹体重，计算中草药处理期间的平均日增重（ADG）。

1.3.4 患病仔猪使用中药制剂后生长性能统计及小肠形态观察 试验结束时，仔猪饥饿12 h，每组分别随机选取5 头仔猪，用戊巴比妥钠处死。剖开腹腔分离并取下小肠中段，缓冲液冲洗后剪下一段（约3 cm）用组织固定液（10% 甲醛- 磷酸盐缓冲液）固定。将固定的样本进行石蜡组织切片，染色后在显微镜下测量绒毛高度（VH）及隐窝深度（CD），并计算绒毛高度和隐窝深度比（V/C）。

1.4 数据统计 采用SAS 9.2 中的一般线性模型对数据进行分析，采用Duncan’s 法进行多重比较。结果以“平均值± 标准误”表示，P＜0.05表示差异显著。

2 结果

2.1 复合中草药制剂对感染猪流行性腹泻病毒仔猪的治疗效果 由表2 可知，对照组（试验1 组）仔猪的死亡率达到66.7%，治愈率为0.0%。试验 2、3、4 组仔猪的治愈率分别为 53.3%、66.6%、60.0%，死亡率较试验1 组分别降低60.0%、63.4%、63.4%。可见中草药制剂对PEDV 感染仔猪具有良好的治疗效果，且存活率显著提高。

表2 复合中草药制剂对感染猪流行性腹泻病毒仔猪的治疗效果

2.2 复合中草药制剂对感染猪流行性腹泻病毒仔猪生长性能的影响 由表3 可知，PEDV 及中草药处理均显著影响仔猪生长性能，对照组（试验1 组）仔猪在中草药处理期间体重降低，ADG 为负增长。与试验1 组相比，试验3、4 组仔猪平均末重分别显著提高 11.5%、10.9%（P＜ 0.05），试 验 2、3、4 组 ADG 分 别 显 著 提 高 1600.0%、2100.0%、1900.0%（P＜ 0.05），流行性腹泻引起的失重得到显著改善。

表3 复合中草药制剂对感染猪流行性腹泻病毒仔猪生长性能的影响

2.3 复合中草药制剂对感染猪流行性腹泻病毒仔猪小肠形态的影响 由表3 可知，中草药处理患PED 的仔猪后，显著改变仔猪小肠形态。与试验 1 组相比，试验 2、3、4 组仔猪十二指肠 VH 分别显著增加 9.5%、13.0%、11.8%（P＜ 0.05），V/C 显 著 增 加 16.1%、23.3%、16.3%（P＜ 0.05），CD 有所降低，但差异不显著（P＞ 0.05）。试验3 组仔猪空肠VH 较试验1 组增加16.2%（P＜ 0.05），CD 降 低 18.5%（P＜ 0.05），试 验 2、3、4 组 V/C 较 试 验 1 组 分 别 显 著 增 加 10.8%、42.5%、14.4%（P＜0.05）。此外，与试验 1 组相比，试验3、4 组仔猪回肠VH 分别显著增加13.0%、12.5%（P＜ 0.05），试验 3 组 CD 降低 11.2%，而试验 2、3、4 组 V/C 分别显著降低 15.7%、27.2%、18.0%（P＜0.05）。其余指标较试验1 组也有一定改善，但未达显著水平。

表4 复合中草药制剂对感染猪流行性腹泻病毒仔猪小肠形态的影响

3 讨论

3.1 复合中草药制剂对感染猪流行性腹泻病毒仔猪的治疗效果 PED 仅发生于猪，对各年龄段的个体均具有感染性，哺乳仔猪的发病率和死亡率更高。PEDV 是我国病毒性腹泻主要致病病原之一，由于疫苗的有效性不足以预防PEDV 感染，并且对PED 的治疗无特效药，因此，寻找更安全、廉价、有效的防治PED 的措施一直是研究重点。体内外的研究证明，中草药具有抗病毒、增强动物机体免疫力、促进生长等作用，是具有前景且安全、有效的饲料添加剂（Kim 等，2008）。药用植物中含有许多生物活性物质，包括生物碱、呋喃、硫代苯、萜类、黄酮类、多酚类等，它们通过阻断病毒进入或抑制病毒遗传物质复制，或凭借其抗氧化活性而起到抗病毒作用（陈兵，2014）。本研究发现，感染PEDV 的仔猪死亡率达66.7%，无治愈个体，而中草药制剂处理组死亡率低于7.0%，治愈率显著提高。黄世才等（2017）研究表明，在湖南一爆发PED 的猪场内用不同中草药制剂处理泌乳母猪，结果表明，仔猪的存活率分别为67.12%和90.19%，而对照组仔猪存活率仅为11.07%，表明所用中药制剂通过过奶作用对仔猪起到防治效果，显著提高仔猪存活率。刘衍芬等（2016）发现，以穿心莲为主要成分，用浸泡、煎煮方式制备的中药制剂处理PEDV 感染的哺乳仔猪，结果显示，治疗效果优于常规治疗组及黄芪多糖治疗组。以上研究表明，中药制剂对PED 具有较好的治疗效果，且复合制剂的治疗效果优于单一成分。

3.2 复合中草药制剂对感染猪流行性腹泻病毒仔猪生长性能的影响 仔猪感染PEDV 后的典型症状包括呕吐、腹泻等，同时降低仔猪采食量及体重增长率甚至降低体重，严重降低生长性能，影响生产效益。本研究结果显示，中草药制剂处理组仔猪体重和ADG 显著高于对照组，对仔猪生长有明显的改善作用。前面的结果证实，中草药制剂对患PED 仔猪具有显著的治疗效果，即仔猪腹泻、呕吐等症状逐渐减轻甚至消失，表明仔猪失水状态得到缓解，并且逐渐恢复采食，从而体重较对照组得到一定增长。杨久春等（2019）将白术、党参等药材加水侵泡后治疗患PED 的仔猪，结果发现，对照组体重较治疗前降低14.7%，治疗后中药处理组体重较对照组高19.9%。研究发现，中草药中的活性成分能促进水、钠从肠腔向肠上皮细胞转运，改善肠道内环境（吴立夫等，1998）。此外，中药中多糖等成分能促进肠道有益微生物增殖，改善肠道微生物环境（王进宇等，2017）。而饲粮中添加中草药能显著提高仔猪肠道中蛋白酶、二糖酶等消化酶的活性，促进蛋白及淀粉的利用，减少了养分在大肠内的发酵，从而在增加养分利用的同时减少腹泻（朱仁俊等，2002）。表明，中草药制剂对感染PEDV 的仔猪具有改善生长的作用。

3.3 复合中草药制剂对感染猪流行性腹泻病毒仔猪小肠形态的影响 肠道健康是反映动物健康状态至关重要的指标之一，肠道形态在一定程度上可以反映肠道结构和功能。VH 及V/C 值越高，表明肠道对营养物质的消化和吸收能力越高（陈凌锋等，2017）。PEDV 感染引起肠道发生病变，如严重萎缩性肠炎，肠绒毛融合。因此，PEDV 感染仔猪会出现肠绒毛萎缩和隐窝增生，即VH 降低和CD 增加，降低肠道对养分的利用能力。研究报道，黄芪、太子参等中药制剂添加到饲粮中能显著增加雏鸭、仔猪等家畜的小肠VH、V/C，降低CD，促进肠道发育（赵文文等，2018 ；陈凌锋等，2017）。本研究结果显示，中草药制剂处理组仔猪小肠VH、V/C 较对照组显著提高，空肠和回肠CD显著降低。表明中草药制剂对PEDV 感染仔猪的肠道黏膜结构的完整性具有积极影响。

4 结论

综上所述，本研究中使用的中草药提取物对仔猪流行性腹泻具有良好的治疗效果，同时，改善了仔猪生长性能和肠道健康，具有较好的应用前景。在本试验的条件下治疗剂量为0.8 g/d 时效果最佳。