李纪鹏 陈丽萍 俞万钧

肺癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，化疗药物多西他赛（docetaxel）已广泛用于肺癌临床一线治疗。然而，化疗耐药大大限制了患者的临床获益[1-3]。研究表明，上皮-间质转化（epithelial to mesenchymal trasnsition，EMT）是导致肿瘤化疗耐药的重要原因，EMT是以上皮标志物E-钙黏蛋白（E-cadherin）的减少或缺失以及间质标志物波形蛋白（vimentin）增多为主要特征，同时伴随多条信号转导通路的激活。白花蛇舌草（Hedyotis diffusa willd，HDW）为茜草科耳草属，研究表明，白花蛇舌草制剂能通过调节细胞周期、诱导凋亡作用相关的信号通路的蛋白表达发挥抗肿瘤效应[4-5]。本研究将利用前期建立的肺癌耐多西他赛细胞系A549/DTX[6]，探讨白花蛇舌草干预其化疗的作用及潜在机制，为抗肿瘤药物选择提供理论支持。

1 材料与方法

1.1 材 料 人肺癌细胞系A549 购自中科院上海细胞库，耐药细胞系A549/DTX 为本实验室构建，能稳定生长于终浓度50μg/L 的多西他赛[6]。多西他赛为北京百灵威科技有限公司产品（批号LE70P68）。白花蛇舌草由医院药房提供（购自华东医药股份有限公司，批号190116）。DMEM 培养基（批号2085250）和胎牛血清（批号2036224C）为美国Gibco公司产品；E-cadherin（批号SC8426）、vimentin（批号SC6260）和PI3K（批号SC1637）、AKT（批号SC5298）及其磷酸化抗体（批号SC52148，SC52940）为美国Santa Cruz 公司产品。细胞培养板和Trans-well 小杯购自Corning 公司。

1.2 细胞培养 A549 和A549/DTX 细胞均用含10%胎牛血清的DMEM 培养基于5%CO2的37℃培养箱中培养。A549/DTX 细胞的培养基中另加入终浓度为50μg/L 的多西他赛。

1.3 白花蛇舌草乙醇提取物（ethanol extract of hedyotis diffusa willd，EEHDW）制备 白花蛇舌草应用95%乙醇进行回流提取，过滤，回收乙醇，将过滤液浓缩至1.05 的相对密度，然后进行真空干燥获得白花蛇舌草粉末提取物。……