李敏，尹路遥，王东凯

(1.沈阳药科大学药学院，沈阳 110016；2.华北制药河北华民药业有限责任公司，石家庄 052165)

头孢泊肟酯(cefpodoxime proxetil，CPDX-PR)属于高效第3代头孢菌素，为头孢泊肟(cefpodoxime，CPDX)前体药物，口服后经肠管吸收，由肠管壁酯酶迅速水解成具有抗菌活性的头孢泊肟。头孢泊肟酯几乎不溶于水[1]。在临床主要用于敏感菌所致呼吸道感染、泌尿生殖系统感染、皮肤及软组织感染及儿科感染等。干混悬剂具有药物吸收良好，制成混悬剂后颗粒分布均匀，在胃肠道分布面积广、吸收快、生物利用度高等优点，还可避免片剂、胶囊剂难吞服的缺点，适用于儿童、老年人及吞咽困难的患者服用[2]。该药由日本三共株式会社开发研制，1990年在日本上市，商品名Banan，中文名为“博拿”。

笔者在本实验对头孢泊肟酯干混悬剂处方及制备工艺进行研究，并参照《中华人民共和国药典》(2015年版)有关要求，对其溶出度及溶出曲线测定方法进行研究，建立了快速、准确、专属、灵敏、重复性好的溶出曲线测定方法，可以更好地用于本品的质量控制。

1 仪器与试药

1.1仪器 LSH2-6A湿法混合制粒机(中国航空工业第一集团公司)，UV2300型紫外-可见分光光度仪(上海天美)，RC806智能溶出实验仪(天津市天大天发科技有限公司)，XS105电子天平(梅特勒托利多仪器公司，感量：0.01 mg)。Agilent 1210高效液相色谱仪[安捷伦科技(中国)有限公司]。

1.2药品与试剂 头孢泊肟酯对照品(中国食品药品检定研究院，批号：130517-200802，以C15H17N6O6S2计含量为73.6%)，头孢泊肟酯干混悬剂(公司中试产品，批号：H916140501，H916140502，H916140503，规格：50 mg/袋)；头孢泊肟酯干混悬剂对照药品(BANAN®，日本第一三共株式会社，规格：1 g：50 mg/袋，批号：0369)。蔗糖(南宁糖业股份有限公司伶俐糖厂，批号：S20141221，含量：99.8%)；交联羧甲基纤维素钠(德国JRS药用辅料公司，批号：S3201011025，含量：99.4%)；黄原胶(淄博中轩生化有限公司，批号：S18140005，含量：99.9%)；羟丙甲纤维素(安徽山河药用辅料股份有限公司，批号：32062141001)；甘露醇(河北华旭药业有限责任公司，批号：32050142001，含量：99.9%)；二氧化硅(湖州展望药业有限公司，批号：3200812C002，含量：99.7%)；阿斯巴甜(常州市牛塘化工有限公司，批号：S10024021XNM，含量：99.7%)，氯化钠(山东肥城精制盐厂，批号：201402008，含量：99.8%)，谷氨酸钠(上海味之素调料品有限公司，批号：131128A4，含量：99.3%)，黄氧化铁(宁波一品生物技术有限公司，批号：32067142001，含量：98.7%)，甜橙味粉末香精(浙江巨邦高新技术有限公司，批号：32077132001，含量：99.1%)。纯化水，甘氨酸、氯化钠、盐酸、甲醇均为分析纯。

2 方法与结果

2.1处方前研究 头孢泊肟酯属于无定型粉末，无固定熔点，在水中不溶解。破坏性实验表明，头孢泊肟酯在光、热、湿、酸性条件下稳定性较差，可以被降解。头孢泊肟酯干混悬剂采用湿法制粒，考虑到干混悬剂的制剂特性，将沉降体积比、颗粒物料性状作为首要考察条件，溶出度指标是处方筛选重点考察项目。综合考虑沉降体积比、颗粒物料性状、溶出度及pH值等指标。

2.2处方筛选及制备工艺

2.2.1处方筛选 根据原研制剂处方[3]和专利CN101278914.B[4]中所提到的辅料种类，结合头孢泊肟酯特点，进行处方设计，根据干混悬剂的质量考核标准进行筛选，并与参比制剂进行对比。矫味剂、色素等辅料选用常规用量，处方筛选采用单因素考察与多因素考察联合方式。首先采用单因素考察填充剂和助悬剂，处方筛选设计(以40袋样品量为标准)及结果见表1。

处方A颗粒偏硬，吸潮情况严重，考虑主要由于蔗糖易吸潮，处方B则颗粒相对适中，因此填充剂选用蔗糖与甘露醇联合应用。处方C、D、E的体积沉降比分别为0.88，0.57，0.94，表明黄原胶助悬效果比羟丙甲纤维素好，两者混用效果最好。

依据初步筛选结果，采用多因素考察设计进行处方筛选，综合考虑颗粒情况、沉降体积比、溶出度、pH值及吸湿增重等指标。处方筛选设计见表2；综合评价结果见表3。根据与参比制剂的结果比较，最终选用处方9。

2.2.2制备工艺 蔗糖粉碎过30目筛(筛孔内径：613 μm)，除原料、香精外其余辅料均过40目筛(筛孔内径：425 μm)备用。取羟丙甲纤维素(E5)，加纯化水搅拌溶解制备成浓度为6%粘合剂。称取处方量的头孢泊肟酯、蔗糖、交联羧甲基纤维素钠、黄原胶、甘露醇、二氧化硅、阿斯巴甜、氯化钠、谷氨酸钠及黄氧化铁，加入湿法制粒机预混5～10 min，分次加入粘合剂适量，制备软材；将所制备软材出料至沸腾干燥机，30目制粒，50～60 ℃通风干燥，30目整粒；加入处方量甜橙味粉末香精，混合5～10 min，即得。

表1 头孢泊肟酯干混悬剂处方初步筛选

Tab.1 Preliminary formulation screening of cefpodoxime proxetil for suspension g

处方原辅料用量(40袋)头孢泊肟酯(以头孢泊肟计)蔗糖甘露醇黄原胶羟丙甲纤维素交联羧甲基纤维素钠低取代羟丙基纤维素二氧化硅处方A23201.2001.61.2处方B22481.2001.61.2处方C22481.2001.61.2处方D224801.201.61.2处方E22481.20.401.61.2

表2 头孢泊肟酯干混悬剂处方筛选

Tab.2 Formulation screening of cefpodoxime proxetil for suspension g

处方头孢泊肟酯(以头孢泊肟计)蔗糖甘露醇黄原胶羟丙甲纤维素交联羧甲基纤维素钠低取代羟丙基纤维素二氧化硅处方123201.20.00.01.61.2处方222480.01.20.01.81.2处方322480.80.80.21.61.2处方422480.61.00.61.01.2处方5218140.61.01.60.01.2处方6218140.41.21.80.61.2处方7214180.41.21.60.81.2处方8214180.21.02.00.01.2处方9218140.41.22.40.01.2

表3 头孢泊肟酯干混悬剂处方筛选评价

2.3优化处方的性质考察 外观：浅黄色粉末；3批头孢泊肟酯干混悬剂沉降体积比分别为0.99，0.98及0.98；pH 值分别为4.7，4.8及4.8；水分采用卡式水分测定法，结果分别为0.9%，1.0%及1.2%；吸湿增重分别为4.78%，4.65%及4.81%。

2.4溶出度检查

2.4.1空白辅料干扰 取处方量空白辅料约0.1 g，照溶出度测定法进行稀释，在200～400 nm波长范围进行光谱扫描。辅料在波长259及264 nm处均无紫外吸收。

2.4.2测定波长选择 取头孢泊肟酯干混悬剂适量，以甲醇溶解后，用各溶出介质(pH值1.2盐酸、pH值4.0醋酸盐缓冲液、pH值6.8磷酸盐缓冲液、水、pH值3.0甘氨酸-氯化钠-盐酸)稀释制成每毫升约含头孢泊肟酯11 μg的溶液，作为供试品溶液。取供试品溶液，以各对应溶出介质为空白，按照紫外-可见分光光度法，在波长200～400 nm范围内扫描。

由结果可知，头孢泊肟酯干混悬剂溶出度检测波长为259 nm(pH值3.0甘氨酸-氯化钠-盐酸)、264 nm(pH值1.2盐酸、pH值4.0醋酸盐缓冲液、pH值6.8磷酸盐缓冲液、水)。

2.4.3线性范围 精密称取头孢泊肟酯对照品11.28 mg，置10 mL量瓶，加甲醇适量使溶解，以溶出介质溶解并稀释至刻度，作为对照品贮备液。分别量取对照品贮备液0.2，0.5，0.8，1.0，1.5，2.0 mL置100 mL量瓶，加溶出介质稀释定容至刻度，照紫外-可见分光光度法测定，溶出介质为空白对照，记录吸光度值。以头孢泊肟浓度(C，μg· mL-1)为横坐标，吸光度(A)为纵坐标进行线性回归。线性方程为A=0.042 3X-0.002，R2=0.998 4，结果表明头孢泊肟浓度在1.66～16.6 μg· mL-1范围内，溶液浓度与吸光度呈良好的线性关系。

2.4.4精密度实验 取上述供试品溶液，分别测定吸光度6次，结果为0.351，0.349，0.355，0.351，0.353，0.351，平均0.352，RSD为0.59%，结果表明该法测定精密度良好。

2.4.5重复性实验 取本品(批号：H916140501)6袋，分别测定吸光度，结果为0.461，0.469，0.459，0.463，0.462，0.466，平均0.463，RSD为0.36%。结果表明该溶出测定方法重复性良好。

2.4.6回收率实验 分别称取头孢泊肟酯对照品(约含头孢泊肟酯5.5，8.9和11 mg)各3份，置9个10 mL量瓶，用pH值3.0甘氨酸-氯化钠-盐酸稀释至刻度，摇匀，作为各回收率对照品储备液。精密量取各回收率对照品储备液1 mL，置100 mL量瓶，加入空白辅料21 mg，用pH 值3.0甘氨酸-氯化钠-盐酸稀释至刻度，摇匀，作为 50%，80%，100%供试品溶液，每个浓度3份，共9份。以100%回收率溶液(11.11 mg)为对照溶液。取供试品溶液与和对照品溶液，照紫外-可见分光光度法在259 nm波长处测定吸光度，计算回收率，测定结果见表4。

结果表明本品3个浓度下溶出回收率平均值为100.4%，RSD值为1.12%，说明本法回收率良好。

2.4.7溶液稳定性实验 ①对照品溶液稳定性。取头孢泊肟酯对照品回收率对照溶液，作为稳定性溶液，以溶出介质甘氨酸-氯化钠-盐酸(pH值3.0)为空白，测定紫外吸光度，检测波长259 nm，分别于室温条件下在0，1，2，3，4 h末取各供试品溶液测定吸光度，RSD为0.37%，结果表明对照品溶液在4 h内稳定。

②样品溶液稳定性。取溶出仪溶出液滤过，以溶出介质为空白对照，分别于室温条件下在0，1，2，3，4 h末取各供试品溶液测定吸光度，计算得RSD分别为0.37%，0.33%，0.44%，0.71%和0.98%。结果本品溶液吸光度无明显变化，4 h内稳定。

2.4.8溶出度测定结果 取头孢泊肟酯干混悬剂样品3批，各6袋，以pH 值3.0甘氨酸-氯化钠-盐酸(pH值3.0)为溶出介质，采用紫外-分光光度法测定，检测波长259 nm，转速 75 r·min-1，依法操作，经30 min时取样测定，结果见表5。

表4 溶出度测定回收率实验结果

表5 3批样品溶出度测定结果

Tab.5 Results of dissolution detemination in three batches of samples

%

2.4.9含量测定结果 采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以水-甲醇=55：45为流动相；检测波长为240 nm；柱温40 ℃，精密量取供试品溶液与对照品溶液各10 μL分别注入液相色谱仪，记录色谱图。按外标法计算供试品中C15H17N5O6S2的含量，分别为99.1%，98.9%及99.6%。

2.5溶出曲线的绘制

2.5.1溶出均一性 取自制样品(批号：H916140501)6袋，根据上述已确定溶出方法，测定各样品溶出曲线，确定其溶出均一性，样品在各时间点的溶出RSD分别为2.4%，1.4%，0.73%，1.28%，0.87%；其在15 min溶出均超过85%，溶出相似。测定结果图1。结果表明，在pH值3.0介质中本品溶出批内均一性良好。

2.5.2溶出重复性 取3批供试品(批号：H916140501，H916140502，H916140503)及对照品(批号：0369)，每批取12个样品，于5，10，15，20，30 min时吸取溶出液适量，测定溶出量，绘制4批样品溶出曲线，结果见图2，表明产品溶出均一性良好。由于其在15 min溶出均>85%，与参比制剂溶出相似。

图1 溶出均一性测定结果

Fig.1 Uniformity results of dissolution uniformity test

图2 溶出重复性测定结果

2.5.3溶出曲线的绘制 按照上述确定的5种溶出介质及溶出曲线方法，测定头孢泊肟酯干混悬剂(批号：H916140501)溶出曲线，结果见图3。

图3 头孢泊肟酯5种溶出介质溶出曲线

Fig.3 Dissolution curve of cefpodoxime proxetil in five dissolution media

3 讨论

3.1处方工艺选择 干混悬剂是提高生物利用度的优选剂型，由于其药物以微粒的形式混散于辅料中，因此分散度较大，有利于胃肠道吸收。干混悬剂加水分散后，应符合混悬剂的质量要求，即混悬液中的微粒应均匀分散，不应迅速下沉，沉降后不应结成饼块，经振摇后应迅速再分散。由于干混悬剂的制剂特性，沉降体积比为其处方工艺研究过程中最主要指标之一。处方筛选主要考察助悬剂及填充剂的选择和用量。

根据原研制剂的处方[3]和专利CN101278914.B[4]中所提到的辅料种类，选用黄原胶和羟丙甲纤维素为助悬剂，选用蔗糖和甘露醇联合作为填充剂，头孢泊肟酯味苦，有异臭，处方中加入适量阿斯巴甜、氯化钠、谷氨酸钠及甜橙味粉末香精作为矫味剂，使得干混悬剂口感更好，易被患者尤其是儿童患者接受。控制原辅料的粒度，采用常规的湿法制粒、整粒及干燥工艺，制备工艺相对容易控制。

3.2方法学验证溶出介质的选择 日本厚生省选择水为溶出介质[5]，而吴琦琦等[6]报道，在0.1 mol·L-1盐酸中，转速为50 r·min-1时，样品可能产生凝胶化现象，膨胀结块，不能有效溶出。研究表明，头孢泊肟酯与食物同服会增药物浓度-时间曲线下面积(AUC)和峰浓度(Cmax)，因而该药宜饭后服用。人体空腹时胃液pH值为1.0，饭后被稀释至约pH值3.5，因此《中华人民共和国药典》2015版[7]及《美国药典》[8]溶出介质均为甘氨酸-氯化钠-盐酸(pH值3.0)更能模拟该药品在体内溶出的实际情况，更合理。因此溶出曲线方法学验证选用甘氨酸-氯化钠-盐酸溶液(pH值3.0)作为溶出介质。

3.3溶出测定方法的选择 《中华人民共和国药典》2015年版及《美国药典》溶出度测定均选择紫外-可见分光光度法，而日本厚生省选择高效液相色谱(HPLC)法，通过HPLC法及紫外-可见分光光度法分别测定头孢泊肟酯在5种溶出介质中的溶出，F检验对测得数据进行评估，结果表明两种方法间无显著差异。由于头孢泊肟酯A、B异构体的保留时间分别为24和30 min，无法及时有效测定，不适用于溶出曲线研究，最终选定紫外-可见分光光度法进行溶出曲线测定。

3.4溶出曲线测定介质的确定 人体消化道的pH值全范围为1.2～6.8，参考日本厚生省公布的头孢泊肟酯干混悬剂溶出曲线测定法，其溶出介质分别为pH值1.2盐酸、pH值6.8磷酸盐缓冲液、水、pH值4.0醋酸盐缓冲液；头孢泊肟酯的解离常数pKa为3.20，《中华人民共和国药典》2015年版收载品种头孢泊肟酯干混悬剂质量标准中溶出度项以pH值3.0甘氨酸-氯化钠-盐酸为溶出介质；为了真实反映药物体内生物利用度，并对不同产品作出合理区分，进而预测药物的体内吸收过程[9]，综合分析选择以pH值1.2盐酸、pH值4.0醋酸盐缓冲液、水、pH值6.8磷酸盐缓冲液、pH值3.0甘氨酸-氯化钠-盐酸为溶出介质，测定其溶出曲线，进行系统考察。

3.5溶出相似性的确定 美国食品药品管理局提出采用溶出曲线来评价药品内在质量、即延伸至仿制药与原研药是否生物等效的情况，并规定采用f2因子对溶出曲线的一致性进行评估。日本于1998年推出的“药品品质再评价工程”采用的手段是通过体外溶出度实验来对药品的内在品质进行评估[10]。溶出度测定是体外评价药物质量、判断药物临床疗效的有效方法，是评价药物渗透吸收和生物利用度的重要指标，即参比制剂与仿制制剂的4条溶出曲线的一致性。本品属低溶解性-低渗透性药物，溶出曲线主要目的在于提高BE实验的通过率，体外溶出一致，体内生物等效性的概率会大大提高。根据生物药剂学分类系统，如果药物在15 min内溶出达到85%，可认为两批产品溶出行为相似。本研究中参比制剂和自研制剂在pH值为1.2盐酸、pH值3.0甘氨酸-氯化钠-盐酸、pH值4.0醋酸盐缓冲液、pH值6.8磷酸盐缓冲、水5种溶出介质中15 min溶出均超过85%，自研制剂与参比制剂在上述溶出介质中溶出相似，本结果为进一步生物等效性研究奠定了基础。