刘欢 王丽强 单镜源 罗振国

摘要：目的 检测人前列腺组织中NUCB2和Bcl-2蛋白的表达，探索二者在前列腺癌中表达的意义和相关性。方法 收集选取本院2010年1月至2019年1月的前列腺组织标本，及病例临床资料，应用免疫组化法检测在良性前列腺增生（BPH）、前列腺上皮内瘤变（PIN）及前列腺癌（PC）组织中Nuxb2与Bcl-2的表达，并分析二者在PC组织中的表达有无相关性。结果 NUCB2在PC组织中的表达显著高于BPH和PIN组织，其表达与年龄无关，与Gleason分级、术前血清PSA有关;<5年生存期病例的NUCB2表达阳性率高于>5年生存期病例。Bcl-2在PC组织中的表达显著高于BPH和PIN组织，其表达与年龄无关，与Gleason分级及血清PSA均有关。在5年生存率上表达无差异。在前列腺癌组织中Nucb2与Bcl-2的表达呈正相关（P =0.012）。结论 NUCB2与Bcl-2两者间可能存在一种相关性，联合检测二者有助于前列腺癌的进一步研究。NUCB2的检测可能有助于评估前列腺癌的预后。

关键词：前列腺癌;NUCB2 Bcl-2;免疫组化

【中图分类号】R697  【文献标识码】A    【文章编号】2107-2306（2020）02-018-03

前列腺癌是老年男性泌尿生殖系统常见的恶性肿瘤之一，在中国，近年来前列腺癌的发病率一直在上升，也是导致男性因癌症相关死亡的主要原因^[1]。尽管我们在前列腺癌的诊断和辅助治疗方面取得了相当大的进步，但是迄今为止仅有低级别和局灶性前列腺癌治愈率达60%左右，中晚期患者5年生存率仍低于30%^[2-3]，患者整体生存率无明显提高。因此对前列腺癌发生发展以及治疗和预后的研究具有重要意义因此对前列腺癌发生发展以及治疗和预后的研究具有重要意义。1992年，Kanai Y，Tanuma S^[4]等在小鼠及人细胞中发现了一种EF手型钙结合蛋白，并将其命名为核组蛋白（ nucleobindin-2，NUCB2） 。目前发现NUCB2具有特殊的结构功能，并且是一种癌症相关基因，该基因在胃癌、乳腺癌、前列腺癌、肾透明细胞癌等中被相继报道。BCL-2即B细胞淋巴瘤-2基因，抑制凋亡是目前研究的与凋亡关系十分密切的原癌基因之一，可抑制细胞凋亡延长其生长，导致肿瘤的发生^[4]。

1、材料与方法

1.1、标本来源及分组

收集佳木斯大学附属第一医院病理科2010年1月至2019年1月存档前列腺石蜡标本，将病理组织分为三组，分别为前列腺癌组、前列腺上皮内瘤变组，以及前列腺良性增生组。其中前列腺癌51例、前列腺上皮内瘤变共39例[低级别上皮内瘤变（LGPIN）18例、高级别上皮内瘤变（HGPIN）21例]、良性前列腺增生20例。两位资深病理医师对所有标本进行严格审查。前列腺癌病例组患者年龄57-82岁，平均年龄 72岁，≥72岁者30例，<76岁者21例。通过查阅病例，搜集患者术前血清前列腺特异性抗原（PSA）水平。所有患者术前均无放化疗..。前列腺癌组进行Gleason评分，对同一肿瘤的主要结构和次要结构分别评分，两项评分相加总积分为≤5分者列为高分化组（4例）、6～7分者列为中分化组（19例）、8～10分者列为低分化组（22例）。对前列腺癌病例组进行随访，共40例患者满足条件，其中5年内死亡25例，5年以上存活15例。

1.2、试剂

兔抗人 NUCB2多克隆抗体购自武汉优尔生，兔抗人Bcl-2单克隆抗体，SP免疫组化染色试剂盒、DAB显色试剂购自北京中杉金桥。

1.3、主要方法

标本按理想实验要求切片;60℃烤箱烘烤1小时;二甲苯分梯度脱蜡;再用梯度酒精脱去二甲苯;PBS和蒸馏水冲洗;置于EDTA抗原修复液PH9.0高温高压抗原修复;切片至Tween 20，浸泡震荡冲洗去污;切片至于3%的H2O2中灭活内源性酶及封闭内源性生物素，山羊血清抗原封闭;滴加配置好浓度的Nucb2一抗、滴加即用型Bcl-2一抗，常规孵育;滴加与一抗相匹配的二抗，再次孵育;每一步之间用PBS冲洗3次，每次3分钟;滴加显色剂，显微镜下控制显色时间，用蒸馏水充分冲洗;苏木精复染细胞核;封片，光学显微镜下观察结果。阳性结果判定由本院两位病理科资深医师在高倍镜视野下，进行阳性结果判定;最终结果分为：阳性表达、高表达和低表达。

1.4、统计学方法

采用SPSS26.0统计软件进行统计学分析。NUCB2和Bcl-2在前列腺癌、前列腺上皮内瘤变及良性前列腺增生组织中的表达差及相关性分析采用 χ2检验，以a=0.05为显著性检验水平，P<0.05为差异有统计学意义。

2、结果

2.1、NUCB2、Bcl-2在前列腺癌、前列腺上皮内瘤变及良性前列腺增生组织中的表达。

NUCB2主要表达于腺上皮细胞胞质内，呈棕黄色至棕褐色。NUCB2在BPH、LGPIN、HGPIN及PC组阳性率分别为10%，11.11%，14.29%及70.59%。NUCB2在PC组中的阳性率明显高于BPH组、LGPIN组和HGPIN组，差异有统计学意义（P<0.05见表1）。

Bcl-2主要表达于正常前列腺的腺上皮细胞以及前列腺癌细胞的细胞质，在BPH、LGPIN、HGPIN及PC组阳性率分别为15%，27.78%，52.29%及76.74%。在PC组中的阳性率明显高于BPH组、LGPIN组和HGPIN组，差异有统计学意义（P<0.05见表1）。

2.2、NUCB2和Bcl-2的表达与前列腺癌临床病理参数的关系。

在前列腺癌组织中，NUCB2表達与患者年龄无关;与Gleason评分和术前血清PSA值有关，随着Gleason评分的增高，NUCB2的表达率也增高，同样随着术前血清PSA值的增加，NUCB2的表达率也增高，差异有统计学意义（P<0.05）。<5年生存期病例的NUCB2表达阳性率高于≥5年生存期病例，差异有统计学意义（P〈0.05见表2）。

Bcl-2表達与患者年龄、5年生存率均无关，差异无统计学意义（P>0.05）;与Gleason评分和术前血清PSA值有关，随着Gleason评分的增高，Bcl-2的表达率也增高，同样随着术前血清PSA值的增加，NUCB2的表达率也增高，差异有统计学意义（P>0.05见表2）。

2.3、NUCB2与Bcl-2在高级别上皮内瘤变组HGPIN和高分化前列腺癌PC组中的表达。

NUCB2在高分化PC组中阳性表达率高于HGPIN组，差异有统计学意义（P<0.05），而Bcl-2在高分化PC组中阳性表达率也高于HGPIN组，但差异无统计学意义（（P>0.05见表3）。

2.4、NUCB2表达与PC预后的关系。

预后分析得知，前列腺癌组中，共有40人满足5年生存率调查。Nucb2组中，<5年生存率的25人中，23人阳性表达，2人阴性表达;≥5年生存率的15人中，9人阳性表达，6人阴性表达，阳性和阴性患者间术后生存差异有统计学意义。

Bcl-2组中，<5年生存率的25人中，18人阳性表达，7人阴性表达;≥5年生存率的15人中，9人阳性表达，6人阴性表达，阳性和阴性患者间术后不生存差异无统计学意义（见表2）。

2.5前列腺癌中NUCB2与Bcl-2表达的相关性

NUCB2、Bcl-2在前列腺癌组织中的表达呈正相关性（见表4）

4、讨论

前列腺癌患者主要是老年男性，近年来呈现明显上升趋势，目前前列腺癌位居我国男性泌尿生殖系统恶性肿瘤中发病率的第三位^[6]。因此，因此，对于前列腺癌的发生、发展和诊断已经成为一个重要的课题。

NUCB2也称为NEFA蛋白，是一种新的肿瘤相关基因，最近研究发现与乳腺癌的复发和不良预后密切相关^[7]，而且体外细胞实验结果显示能够有效的增加乳腺癌细胞系的增殖，转移和侵袭能力。所有的结果显示和乳腺癌的转移密切相关，而且可以作为预测乳癌预后的一个重要指标^[8]。在正常胃组织，Nucb2表达较高，主要阳性分布于胃粘膜泌酸腺内分泌细胞。用RT-PCR法分析和比较胃癌组织中癌组织和癌旁组织中nucb2m RNA的变化，发现胃癌组织中nucb2m RNA水平下调了50%，nucb2在胃癌组织中具有典型的抑癌基因[9-10]。

本课题中前列腺癌组Nucb2表达明显高于前列腺增生组和前列腺上皮内瘤变组（P<0.05），本实验显示，在PC组中NUCB2表达与年龄无关，与肿瘤的Gleason分级、术前血清PSA相关，差异有统计学意义，血清PSA—直被认为是前列腺癌的理想分子标志物，血检测被广泛应用于前列腺癌的发生、进展、治疗后残余癌的治疗及前列腺癌复发后的随访等过程中。随着术前血清PSA值的升高，Nucb2蛋白的表达率也增高。前列腺癌Gleason评分与前列腺癌的生物学行为和临床预后之间具有很好的关联性，随着Gleason分级的增加，评分越高，前列腺癌分化越差，NUCB2表达率越高，提示NUCB2表达可能与癌症的进展和分化有关。NUCB2在<5年与≥5年生存期病例中的表达存在差异，差异有统计学意义，提示Nucb2的异常表达可能与前列腺癌的预后有关。HGPIN目前认为是一种癌前病变，组织学形态及其组织的生物学行为以及与PC类似并有关联，尤其是高分化前列腺癌。这组课题表明，高分化PC组的Nucb2阳性表达率高于HGP IN组，差异有统计学意义，提示其可用于鉴别诊断。

本实验中显示Bcl-2在前列腺癌组中的表达明显高于良性前列腺增生组和前列腺上皮内瘤变组，差异有统计学意义，提示bcl-2可能参与了前列腺癌的发生。在PC组中Bcl-2表达与年龄无关，与肿瘤的Gleason分级、术前血清PSA相关，差异有统计学意义，随着Gleason分级的增加，Bcl-2表达率越高，提示Nucb2表达可能与癌症的进展和分化有关。Bcl-2在<5年与≥5 年生存期病例中的表达有差异，但无统计学无显著差异，在高分化PC组和HGPIN组中表达存在差异，但无统计学无显著差异。

通过相关性分析得知NUCB2、Bcl-2在前列腺癌组织中的表达呈正相关性（P<0.05）。由此可以提示NUCB2的高表达引起Bcl-2的高表达，影响细胞凋亡失衡，NUCB2与Bcl-2两者间存在一种相互作用机制在前列腺癌中发挥作用，对前列腺癌的发生、发展密切相关，检查其表达水平对疾病鉴别诊断和治疗预后有一定帮助，对鉴别高分化PC和中HGPIN有一定意义。目前NUCB2 与 Bcl-2之间的相互关系以及生物学功能方面的研究还比较少，尤其是在肿瘤中的相互作用机制，需要扩大样本进行更详细的研究。

参考文献

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