STIP1基因沉默对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响

2020-06-28周鹏飞

南昌大学学报(医学版) 2020年1期

朱鹏，刘琮，李博，赵晨，周涛，周鹏飞，张兵

(西安医学院第二附属医院骨外科，西安 710038)

骨肉瘤是青少年最常见的原发性骨肿瘤。骨肉瘤常发生在长骨的表面，常见于股骨远端胫骨近端和肱骨[1]。现在骨肉瘤患者5年生存率接近70%[2]。但仍有部分骨肉瘤患者发生远端转移，常见为肺转移，有证据[3]表明发生肺转移的患者5年生存率只有23%～44%。因此，寻找合适的骨肉瘤早期诊断的标志物和有效治疗的靶分子是进一步提高骨肉瘤患者生存率至关重要的一步。

磷酸化应激诱导蛋白1(stress-induced phosphoprotein 1，STIP1)能够通过调节Hsp70和Hsp90连接及二聚化参与调控细胞的多个生理过程。近年来研究[4-5]证明STIP1在乳腺癌和胃癌中表达上调，然而STIP1在骨肉瘤中的表现尚未见报道。本研究发现STIP1在骨肉瘤细胞中表达上调，通过STIP1基因沉默(si-STIP1)，可抑制骨肉瘤细胞的增殖、侵袭和迁移，为STIP1在骨肉瘤诊断与治疗中的应用提供了实验依据。

1 材料与方法

1.1 实验材料

人成骨细胞hFOB1.19、骨肉瘤细胞系U2OS、MG-63和SaoS-2购自上海中科院细胞库；DMEM培养基购自和胎牛血清购自美国HyClone公司；Lipofectamine 2000和TRIzol试剂购自美国Invitrogen公司；逆转录试剂盒购自美国Promega公司；SBYR Green Mix购自德国Qiagen公司；si-STIP1及其阴性对照(si-NC)购自上海GenePharma公司；细胞裂解液和CCK-8细胞活性测定试剂盒购自上海Beyotime公司；Transwell培养板购于美国Corning公司；STIP1抗体、MMP2抗体、MMP9抗体、p-IGF1R抗体、IGF1R抗体、p-PI3K抗体、PI3K抗体、p-AKT抗体和AKT抗体购自美国Abcam公司；β-actin抗体和GAPDH抗体购自美国Santa Cruz公司；辣根过氧化酶标记的二抗购自北京ZSGB-BIO公司；ECL试剂盒购自美国Pierce公司。