赵振宇

(湖南中医药大学第一附属医院麻醉科,长沙 410000)

microRNA(miRNA)是一种内源性非编码单链小RNA[1]，通过碱基互补配对与靶基因mRNA的3’端非编码区端位点相结合，降解靶基因mRNA或抑制其蛋白翻译[2]。近年来miRNA调控机体炎症反应逐渐成为研究热门，多种miRNA参与了脓毒症的病理生理过程中，如miRNA-147、miRNA-155、miRNA-9、miRNA-346、let-7、miRNA-98、miRNA-142-3p等[3]。miR-33靶向结合ATP结合盒转运体A1(ABCA1)，参与脂质代谢，但是有关免疫炎症的研究甚少[4-5]。有研究[6-8]表明，miR-33是脂多糖诱导单核细胞炎症模型中表达变化明显的miRNAs之一，提示miR-33可能参与了细胞炎症反应调控。本实验使用miRNA靶基因预测软件发现人核受体相互作用蛋白1(NRIP1)可能是miR-33潜在靶点。为了明确miR-33在细胞炎症中的生物学功能，本研究改变人单核细胞(THP-1)巨噬细胞miR-33表达水平，观察THP-1细胞NRIP1蛋白表达以及THP-1细胞炎症因子分泌变化来研究其调控机制。

1 材料与方法

1.1 细胞与试剂

THP-1(中国科学院生物化学与细胞生物学研究所)；脂多糖(美国Sigma公司)；DMEM培养基、胎牛血清、改良型RPMI-1640细胞培养基、Opti-MEM转染培养基(美国Gibco公司)；miR-33 mimics、miR-33 inhibitor(上海吉玛制药技术有限公司)；TransIT-X2®Dynamic Delivery System转染试剂(美国Mirus公司)；NRIP1抗体、β-actin抗体(美国Cell Signaling Technology公司)；辣根过氧化物酶标记的二抗(武汉博士德生物工程有限公司)；Human ELISA试剂盒 TNF-α、IL-6(深圳欣博盛生物科技有限公司)。

1.2 细胞培养及分组

THP-1培养及传代方法：将细胞密度为5×105mL-1的THP-1细胞置于含有10%胎牛血清的改良型RPMI-1640细胞培养基培养，传至第3—6代。随机分组：1)空白对照组(等量磷酸盐缓冲液)；2)miR-33 mimics转染对照组(转染模拟miR-33 mimics)；3)miR-33 mimics转染组(转染miR-33 mimics)；4)miR-33 inhibitor转染对照组(转染模拟miR-33 inhibitor)；5)miR-33 inhibitor转染组(转染miR-33 inhibitor)。各组细胞加入10.0 ng·mL-1LPS刺激细胞24 h。……