邢 磊 赵乐乐 袁红艳 张春华 陆雪林*

1.上海市动物疫病预防控制中心，上海201103；2.上海欣灏珍禽育种有限公司，上海201408

微卫星（SSR）标记技术对加快畜禽性状选育有很大的优势[1]，关于雉鸡的分子标记研究以前尚未有过，而且雉鸡的基因组信息也是未知的。因此，本研究利用高通量测序技术以雉鸡基因组为研究对象对雉鸡的SSR 分子标记进行开发，构建出雉鸡SSR 分子标记数据库，迈开了进行雉鸡分子标记遗传研究的第一步。通过设计特异性引物并经过样本群体的多态性验证[2]，得到了可靠的多态性SSR 标记，旨在为雉鸡种质资源遗传多样性研究、基因定位以及分子标记辅助育种提供分子水平上的有效工具[3]。

1 材料与方法

1.1 试验动物

试验动物来源于上海欣灏珍禽育种有限公司饲养的中华环颈雉（RN）、蒙古雉（MX）和国内雉鸡（D）的纯种后代。3 个品种在同一鸡舍、相同管理条件下饲养。

1.2 血液样本采集及基因组提取

第20 周时，从试验群体中随机挑选105 只母鸡采集血样，各样本翅静脉取血3 mL，4% EDTA抗凝剂抗凝，-20 ℃保存。利用试剂盒法（天根生化（DP318）血液基因组提取试剂盒）提取血样基因组，采用TBS380 结合picogreen 进行浓度和纯度检测，再根据浓度检测结果利用0.8%琼脂糖凝胶电泳检测样本DNA 的完整性，电压120 V，时间20 min。所得DNA 于-20 ℃储存备用。

1.3 微卫星标记的引物设计及筛选

通过454 平台高通量测序，利用MISA 程序在序列中搜索SSR 位点，利用primer3_2.2.3 对搜索得到的SSR 位点设计特异性引物。扩增目标片段为重复序列前1 个碱基到后5 个碱基的片段，扩增产物长度在100～400 bp 之间。……