王磊兰，陈 莹，吴基良*，刘滨磊

(1.湖北科技学院药学院，湖北 咸宁 437100；2.武汉滨会生物科技股份有限公司)

癌症发病率逐年增长，严重危害到全世界人民的健康，寻找能够彻底根除肿瘤的方式迫在眉睫。溶瘤免疫治疗作为一个新兴的生物治疗热点方向，可以激发和利用人体免疫系统去杀伤肿瘤[1]，它的原理是改造天然病毒的基因从而制成特殊的溶瘤病毒，靶细胞中抑癌基因的失活或缺陷使得溶瘤病毒能够有选择性地感染肿瘤细胞，并且在其内大量复制，最终摧毁具有无限增殖能力的肿瘤细胞[2-3]。

oHSV2的基本原理是敲掉野生型II型单纯疱疹病毒ICP34.5和ICP47基因并插入人源的GM-CSF基因，从而降低病毒的神经毒性以及增强机体对病毒的免疫力[4]。它是生物公司研发的肿瘤生物治疗制品，目前处于Ⅰ期临床试验，急需建立一种方便、灵敏度较高和特异性较好的方法，来检测临床癌症患者经oHSV2治疗后，其体液(血液)中的oHSV2，从而了解oHSV2在体内的复制情况，为后续的临床试验提供技术支持。本研究根据oHSV2的基因序列设计了一对特异性引物，提取了前期已经重组好的阳性质粒pHG52d34.5CMVhGM-CSF，测定浓度并换算后梯度稀释为荧光定量PCR的模板，经过反应条件及反应体系的优化后，建立了一种快速检测oHSV2的荧光定量PCR方法。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌液及模拟临床样本

pHG52d34.5CMVhGM-CSF菌液由武汉滨会生物科技股份有限公司实验室重组、转化、鉴定和保存，模拟临床样本(血液)由实验室志愿者捐献。

1.1.2 主要试剂和仪器