董庆园 马德清 杨 学 刘 勇 黄昌军 袁 诚 方敦煌 于海芹 童治军 沈俊儒 许银莲 罗美中 李永平 曾建敏,*

高抗黑胫病烤烟BAC文库的构建及分析

董庆园1,4,**马德清1,4,**杨 学2,**刘 勇1黄昌军1袁 诚1方敦煌1于海芹1童治军1沈俊儒3许银莲5罗美中2李永平1曾建敏1,*

1云南省烟草农业科学研究院, 云南昆明 650021;2华中农业大学生命科学技术学院, 湖北武汉 430070;3云南省烟草公司, 云南昆明 650011;4云南农业大学烟草学院, 云南昆明 650201;5云南省烟草公司临沧市公司, 云南临沧 677099

烟草是重要的模式植物。本研究利用pIndigoBAC536-S载体及d III限制性内切酶酶解烟草基因组DNA的方法, 构建了烟草新品系14-60的细菌人工染色体(BAC)文库。该文库共包含414,720个克隆, 保存在1080块384板中。随机挑选的120个烟草BAC克隆检测结果表明, 外源插入片段大小为97.0~145.5 kb, 平均约为123 kb, 空载率极低(0), 覆盖烟草基因组11倍。用烟草A基因、1基因、基因的特异引物进一步验证, 该文库质量高、可用性强, 为烟草黑胫病抗性基因的克隆以及其他重要农艺性状和品质性状等功能基因克隆研究提供了基础资源。

烟草; 基因组DNA; 细菌人工染色体(BAC); 基因筛选

普通烟草()是林烟草()和绒毛状烟草()杂交后自然加倍而成的异源四倍体植物[1-4]。研究表明, 烟草在生物制药[5-6]和生物燃料[7]方面的应用前景较大。烟草由于容易组织培养和遗传转化[8-9], 已被广泛应用于分子生物学研究, 是重要的模式植物。普通烟草基因组重复序列多、杂合度高, 已公布基因组序列。菲莫国际构建了林烟草(2.636 Gb)和绒毛状烟草(2.682 Gb)的……