王馨琪，刘 卉，金光德，南桂仙

(延边大学农学院，吉林 延吉 133002)

1 研究背景

蒙古柳[Salixlinearistipularis(syn.Salixmongolica)]又名筐柳，主要分布在中国内蒙古、黑龙江、吉林等地[1]，属于落叶小乔木植物。蒙古柳有很强的抗旱耐盐碱性能，根系发达，有很好的防风固沙的作用[2,3]。研究表明，蒙古柳能生长在pH值9.2以上的盐碱地，是盐碱地土壤改良中起重要作用的野生植物资源[4]。蒙古柳的生长特性决定了体内具有适应逆境的机制，但是对蒙古柳的研究主要集中在形态结构[5]、造林[6]、环境改良[7,8]、栽培[9]、防风固沙[10]和有性繁殖等方面[11]，其基因信息和抗盐性机理方面研究几乎没有报道。本研究对于非模式木本植物蒙古柳的抗逆性分子生物学的研究奠定了实验基础。

2 材料与方法

2.1 实验材料

植物材料：从安达盐碱地采集的蒙古柳种子。实验常用试剂：SMART试剂盒购自Clontech公司，DNAMarker、GoTaq酶购自TaKaRa公司，所用试剂均为国产分析纯试剂。

2.2 实验方法

蒙古柳种子的无菌消毒和培养条件：蒙古柳种子用常规方法进行表面消毒，种子播在1/2MS固体培养基中培养，培养室温度控制在24℃±1℃，光照时间设置为9 h光照/15 h黑暗，幼苗长出3～4片真叶后取全株。

RNA的提取和质量检测：利用改良CTAB法提取蒙古柳幼苗总RNA[12]。用DNaseⅠ消化DNA。氯仿抽提一次。用无水乙醇和醋酸钠(3 mol/L)溶液进行沉淀，用75%酒精洗沉淀，晾干后加20 μL DEPC水溶解。测定RNA浓度和纯度，用琼脂糖凝胶电泳检测RNA的完整性。

蒙古柳cDNA-pYES2大肠杆菌文库的构建：以1 μg RNA 为模板，按照SMART技术构建cDNA文库的操作方法合成SMART第一链cDNA，然后以其为模板利用聚合酶链反应进行长链PCR扩增，经过15、18、21、24和27个循环后电泳检测，找出合成双链cDNA最优循环次数，用SMART树脂柱对双链cDNA 分级纯化。……