陈 锋，杨海船，何春欢，李 嘉

（广西壮族自治区中医药研究院，广西中药质量标准研究重点实验室，广西 南宁 530022）

肠胃散是由肉桂叶、吴茱萸、陈皮、艾叶、砂仁、丁香、茯苓、岗松、大叶桉9 味药材组成的外用贴剂，具有温中散寒、燥湿止泻功效，用于寒湿蕴结所致泄泻、腹痛肠鸣，临床辅助治疗腹泻疗效显著，安全性高［1］。

中药复方虽然临床效果确切，但其成分繁多复杂，对单味药材或单一成分的质量控制往往不具有代表性。中药配伍有“君臣佐使”“七情合和”的概念，复方在应用过程中常有增减调整，药性发挥有众多因素，量效关系成为其质量优劣的重要判定指标，而有效成分组在一定程度上反映了中药复杂的物质基础［2-3］。

目前，尚无对肠胃散中成分含有量测定的研究，难以对其质量进行准确客观的评价。因此，本实验针对该方主要药材肉桂叶、吴茱萸、陈皮等进行考察，其性味相近，尤其在治疗肠胃疾病中起到明显的协同作用［4］。同时，桂皮醛、肉桂酸、吴茱萸碱、吴茱萸次碱、橙皮苷是上述药材指标性成分，具有与功能主治相关的药理活性［5-7］，故采用HPLC 法同时测定5 种成分的含有量，以期为肠胃散质量控制提供依据。

1 材料

Waters e2695 系列四元梯度泵高效液相色谱仪，配置PDA 检测器（美国Waters 公司）；XS205电子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；B2200S 超声波清洗器（上海必能信超声有限公司）。橙皮苷（110721-201818）、肉桂酸（110786-201604）、桂皮醛（110710-201720）对照品均购自中国食品药品检定研究院；吴茱萸碱（A0266）、吴茱萸次碱（A0267）对照品均购自成都曼思特生物科技有限公司。肠胃散（批号 201812081、201812082、201812071、201812072、201812073、201812061、201812062、201812063、201812051、201812052）由广西源安堂药业有限公司提供。乙腈为色谱纯；其他试剂均为分析纯；水为纯净水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 Agilent C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相乙腈（A）-0.2% 磷酸（B），梯度洗脱（0～10 min，20%A；10～60 min，20%～45% A，60～80 min，45% A）；体积流量1.0 mL/min；0～60 min 时在283 nm 波长下检测橙皮苷、肉桂酸、桂皮醛，60～80 min 时在215 nm波长下检测吴茱萸碱、吴茱萸次碱；柱温25 ℃；进样量10 μL。

2.2 对照品溶液制备 精密称取各对照品适量，置于量瓶中，甲醇溶解后定容，即得（含橙皮苷112.90 μg/mL、肉桂酸 0.61 μg/mL、桂皮醛12.68 μg/mL、吴茱萸碱5.09 μg/mL、吴茱萸次碱6.45 μg/mL）。

2.3 供试品溶液制备 精密称取本品内容物0.5 g，置于具塞锥形瓶中，精密加入25 mL 甲醇，称定质量，超声提取（80 W、50 kHz）30 min，放冷至室温，甲醇补足减失的质量，摇匀，上清液过滤，取续滤液，即得。

2.4 阴性样品溶液制备 按本品处方，分别制备不含陈皮、肉桂叶、吴茱萸的阴性样品，按“2.3”项下方法制备，即得。

2.5 专属性试验 精密吸取对照品、供试品、阴性样品溶液，在“2.1”项色谱条件下进样测定，结果见图1。由此可知，各成分分离度符合要求，理论塔板数均大于9 000，阴性无干扰。

图1 各成分HPLC 色谱图Fig.1 HPLC chromatograms of various constituents

2.6 线性关系考察 精密称取各对照品适量，置于量瓶中，甲醇溶解定容，制成分别含橙皮苷451.60 μg/mL、肉桂酸2.444 μg/mL、桂皮醛50.70 μg/mL、吴茱萸碱20.36 μg/mL、吴茱萸次碱25.79 μg/mL 的对照品溶液，精密移取1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 mL 于10 mL 量瓶中，甲醇稀释至刻度，摇匀，在“2.1”项色谱条件下进样测定。以溶液质量浓度为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y）进行回归，结果见表1，可知各成分在各自范围内线性关系良好。

表1 各成分线性关系Tab.1 Linear relationships of various constituents

2.7 精密度试验 精密吸取“2.2”项下对照品溶液，在“2.1”项色谱条件下进样测定6 次，测得橙皮苷、肉桂酸、桂皮醛、吴茱萸碱、吴茱萸次碱峰面积RSD 分别为0.20%、0.73%、0.30%、0.23%、0.25%，表明仪器精密度良好。

2.8 重复性试验 取同一批本品（批号201812081）6 份，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，在“2.1”项色谱条件下进样测定，测得橙皮苷、肉桂酸、桂皮醛、吴茱萸碱、吴茱萸次碱含有量RSD 分别为 0.59%、1.05%、1.45%、1.27%、1.15%，表明该方法重复性良好。

2.9 稳定性试验 取同一供试品溶液（批号201812081），室温下 分别于0、4、8、12、16、24 h，在“2.1”项色谱条件下进样测定，测得橙皮苷、肉桂酸、桂皮醛、吴茱萸碱、吴茱萸次碱峰面积RSD 分别为1.26%、1.03%、0.95%、1.14%、1.23%，表明供试品溶液在24 h 内稳定性良好。

2.10 加样回收率试验 称取含有量已知的本品（批号201812081）约0.25 g，共6 份，置于具塞锥形瓶中，精密加入25 mL 对照品溶液，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，在“2.1”项色谱条件下测定，计算回收率，结果见表2。

表2 各成分加样回收率试验结果（n＝6）Tab.2 Results of recovery tests for various constituents（n＝6）

2.11 样品含有量测定 取本品10 批，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，在“2.1”项色谱条件下进样测定，计算含有量，结果见表3。

表3 各成分含有量测定结果（mg/g，n＝2）Tab.3 Results of content determination of various constituents（mg/g，n＝2）

3 讨论

3.1 流动相选择 本实验考察了甲醇-水、乙腈-水、乙腈-0.2%磷酸，发现乙腈-0.2%磷酸洗脱时橙皮苷、肉桂酸、桂皮醛峰形及分离度较乙腈-水均有所改善，而且对吴茱萸碱、吴茱萸次碱无影响，便于检测，故选择其作为流动相［8-10］。

3.2 检测波长选择 经全波长扫描发现，橙皮苷、肉桂酸、桂皮醛对照品溶液在283 nm 处均有较大吸收，与在各自最大吸收波长处测定的含有量差异不大，同时参考2015 年版《中国药典》，确定其检测波长为283 nm；根据文献［11］报道，确定吴茱萸碱、吴茱萸次碱检测波长为215 nm。

3.3 提取条件选择 本实验考察了提取溶剂（甲醇、75%甲醇、50%甲醇）和提取时间（20、30、40 min），发现以甲醇为提取溶剂时，橙皮苷、吴茱萸碱、吴茱萸次碱含有量明显升高，而其他成分无明显变化；超声提取30、40 min 时各成分含有量变化不大，但均高于提取20 min 时。最终确定，最优提取条件为甲醇超声提取30 min。

4 结论

中药成分复杂，药效多样，HPLC 是最常用的分析手段［12］，故本实验采用该方法同时测定肠胃散中橙皮苷、肉桂酸、桂皮醛、吴茱萸碱、吴茱萸次碱的含有量，发现其简便准确，重复性好，可为该制剂质量控制提供参考。然而，该方法也有局限性，如肠胃散中含有丁香酚，它不仅有相关药理活性，也在贴剂经皮给药过程中发挥着重要作用［13］，其含有量较高，但在复方中并无专属性，不适合HPLC 分析。另外，肠胃散是透皮贴剂，含有多种挥发性成分，它们也是重要的药效物质，故相关研究对质量控制、透皮规律、机制阐述都有参考价值［14］。

中药质量标准现代化、国际化对分析手段提出了更高的要求，多种评价体系被广泛应用，技术涵盖色谱、光谱、生物、代谢等多个领域，质量控制模式的多元化正成为发展方向［15］。本实验初步体现了这一点，今后也需要研究人员继续加以探索。