李宝华，戈海泽，刘树业

天津市第三中心医院检验科，天津 300170

肝癌作为最常见的肝脏原发性肿瘤，是世界五大恶性肿瘤之一，位居肿瘤致死原因的第3位。肝癌常伴随肝炎、肝硬化[1]，所以人们认为病毒性肝炎、饮酒过度、遗传及非酒精性脂肪性病变是肝癌发生的重要原因[2-3]。原癌基因激活、抑癌基因失活及信号通路过度活化是肝癌发生的主要分子机制[4]。近年来，随着miRNA研究的不断深入，人们发现miRNA与肝癌的发生和发展有着十分重要的联系[5-6]，miRNA成为研究肝癌的热点之一[7]。miRNA是一段内源性单链小片段非编码RNA，有18～25个核苷酸，一般是通过靶向mRNA 3′UTR来调控细胞基因的表达[8]，从而广泛参与细胞的生命活动，如细胞增殖、凋亡、迁移、代谢等[9-10]。已有研究表明，许多miRNA(如miR-122、miR-199 和miR-21)[11-13]通过调控基因表达从而影响细胞的增殖、凋亡、迁移，参与肝癌的发生和发展过程[14-15]。本研究以肝癌细胞系Huh7细胞为模型，研究miR-499在肝癌发生和发展中的作用机制，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 人肝癌细胞株 Huh7 来源于中国科学院上海细胞库。于本院肝外科采集配对的肝癌组织标本和正常癌旁组织标本各20例，以及另外的35例肝癌组织标本。 本研究经本院伦理委员会审批通过，并与患者签订知情同意书。

1.2主要试剂 10 %胎牛血清、DMEM培养基和胰酶购自Gibico公司，1%青霉素-链霉素双抗购自Sigma公司。反转录试剂盒、实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)定量试剂盒、CCK8试剂盒均购自Thermo公司。RIPA全蛋白裂解液、脂质体2000、碘化丙啶购自Sigma公司。RAB5C一抗购自Abcam公司，结晶紫试剂购自Solarbio公司。……