李雪莹魏运姣∗何小龙姜 涛

（1.武汉市第四医院，华中科技大学同济医学院附属普爱医院药学部，湖北 武汉430033； 2.湖北省药品监督检验研究院，湖北 武汉430075）

健儿膏为中成药复方制剂，由党参、炒白术、炒白扁豆、山药、甘草、黄芪、茯苓、陈皮、炒麦芽、大枣10 味药材组成，具有健脾益气、和胃调中功效，主要用于小儿脾胃虚弱、运化乏力所致的面黄肌瘦、厌食纳呆、大便不调、身体虚弱、发育迟缓、自汗盗汗、贫血脉弱等营养不良症状的治疗［1］。

中药及其复方制剂由多味药材组成，而每味药材又含有多种有效成分，故检测单一成分难以全面评价其质量。健儿膏现行质量标准收载于《卫生部颁药品标准》中药成方制剂第十册，但未对方中药味所含成分进行定量测定，也未检索到相关文献。因此，本实验参考中药质量标志物确定原则［2-5］，采用HPLC 法同时测定健儿膏中君药党参代表性成分党参炔苷、紫丁香苷，臣药炒白术主要有效成分白术内酯Ⅲ、白术内酯Ⅰ，佐药茯苓代表性成分去氢土莫酸、土莫酸、去氢茯苓酸、茯苓酸的含有量，为该制剂质量稳定性和临床疗效一致性提供数据，也为加强其市场监管提供参考。

1 材料

Ultimate 3000 型高效液相色谱仪（美国赛默飞世尔科技公司）；XP6 型电子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；KQ5200B 型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。白术内酯Ⅲ（批号111978-201501，纯度 99.9%）、白术内酯Ⅰ（批号111975-201501，纯度99.9%）、党参炔苷（批号111732-201607，纯度100.0%）、紫丁香苷（批号111574-201605，纯度95.2%）均购于中国食品药品检定研究院；茯苓酸（批号18030404，纯度98.63%）、去氢茯苓酸（批号16032101，纯度99.35%）对照品均购于成都普瑞法科技开发有限公司；去氢土莫酸（批号 17041302，纯度99.0%）、土莫酸（批号16040732，纯度98.0%）对照品均购于南京森贝伽生物科技有限公司。健儿膏（250 g／瓶，批号18080396、18090172、19020251）购于杭州胡庆余堂药业有限公司。乙腈为色谱纯（赛默飞世尔科技有限公司）；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 Diamonsil Plus C18色谱柱；流动相乙腈（A）-0.05% 磷酸（B），梯度洗脱（0～13.0 min，35.0% A；13.0～21.0 min，35.0%～40.0% A；21.0～34.0 min，40.0%～68.0% A；34.0～56.0 min，68.0%～ 90.0% A；56.0～65.0 min，90.0%～ 35.0% A ）；体积流量1.0 mL／min；柱温30 ℃；0～21.0 min 在220 nm波长处检测白术内酯Ⅲ、白术内酯Ⅰ［6-7］，21.0～34.0 min 在266 nm 波长处检测党参炔苷、紫丁香苷［8-9］，34.0～65.0 min在210 nm 波长处检测去氢土莫酸、土莫酸、去氢茯苓酸、茯苓酸［10-11］；进样量10 μL。

2.2 溶液制备

2.2.1 对照品溶液 精密称取白术内酯Ⅲ、白术内酯Ⅰ、党参炔苷、紫丁香苷、去氢土莫酸、土莫酸、去氢茯苓酸、茯苓酸对照品适量，甲醇分别稀释成质量浓度为0.174、0.158、1.172、0.076、0.432、0.228、0.292、0.534 mg／mL 的贮备液，各精密吸取2.5 mL，置于同一50 mL 量瓶中，甲醇稀释至刻度，即得（质量浓度分别为8.7、7.9、58.6、3.8、21.6、11.4、14.6、26.7 μg／mL）。

2.2.2 供试品溶液 称取本品约5.0 g，置于25 mL 具塞锥形瓶中，甲醇稀释至刻度，超声（200 W、40 kHz）处理10 min，0.45 μm 微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。

2.2.3 阴性样品溶液 按处方比例及工艺分别制备缺白术、党参、茯苓的阴性样品，按“2.2.2”项下方法制备，即得。

2.3 系统适应性试验 精密吸取对照品、供试品、阴性样品溶液适量，在“2.1”项色谱条件下进样测定，结果见图1。由此可知，色谱图基线平稳，各成分均能达到有效分离（分离度均＞1.5），理论塔板数按各成分计均大于4 500，阴性无干扰，表明该方法系统适应性良好。

图1 各成分HPLC 色谱图Fig.1 HPLC chromatograms of various constituetns

2.4 线性关系考察 精密吸取“2.2.1”项下对照品溶液各2.0 mL，置于同一20 mL 量瓶中，甲醇制成线标溶液1（白术内酯Ⅲ17.4 μg／mL、白术内酯Ⅰ15.8 μg／mL、党参炔苷117.2 μg／mL、紫丁香苷7.6 μg／mL、去氢土莫酸43.2 μg／mL、土莫酸22.8 μg／mL、去氢茯苓酸29.2 μg／mL、茯苓酸53.4 μg／mL），精密吸取适量，甲醇依次稀释2、5、10、15、20 倍，分别制成线标溶液2～6，精密吸取适量，在“2.1”项色谱条件下进样测定。以溶液质量浓度为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y）进行回归，结果见表1，可知各成分在各自范围内线性关系良好。

表1 各成分线性关系Tab.1 Linear relationships of various constituents

2.5 精密度试验 取“2.2.1”项下对照品溶液，在“2.1”项色谱条件下进样测定6 次，测得白术内酯Ⅲ、白术内酯Ⅰ、党参炔苷、紫丁香苷、去氢土莫酸、土莫酸、去氢茯苓酸、茯苓酸峰面积RSD 分别为 1.16%、1.20%、0.95%、1.17%、1.05%、1.08%、1.11%、0.83%，表明仪器精密度良好。

2.6 重复性试验 取同一本品适量，按“2.2.2”项下方法平行制备6 份供试品溶液，在“2.1”项色谱条件下进样测定，测得白术内酯Ⅲ、白术内酯Ⅰ、党参炔苷、紫丁香苷、去氢土莫酸、土莫酸、去氢茯苓酸、茯苓酸含有量RSD 分别为1.58%、0.71%、1.36%、1.84%、0.66%、1.27%、0.77%、1.46%，表明该方法重复性良好。

2.7 稳定性试验 取同一供试品溶液，于0、2、4、6、12、24 h 在“2.1”项色谱条件下进样测定，测得白术内酯Ⅲ、白术内酯Ⅰ、党参炔苷、紫丁香苷、去氢土莫酸、土莫酸、去氢茯苓酸、茯苓酸峰面积RSD 分别为0.99%、1.05%、0.79%、0.86%、1.12%、1.03%、1.21%、0.92%，表 明溶液在24 h 内稳定性良好。

2.8 加样回收率试验 取含有量已知的本品9 份，每份2.5 g，置于具塞锥形瓶中，精密加入对照品溶液（白术内酯Ⅲ、白术内酯Ⅰ、党参炔苷、紫丁香苷、去氢土莫酸、土莫酸、去氢茯苓酸、茯苓酸质量浓度分别为0.108、0.092、0.808、0.042、0.296、0.128、0.192、0.346 mg／mL）0.5、1.0、1.5 mL 各3 份，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，在“2.1”项色谱条件下进样测定，计算回收率。结果，白术内酯Ⅲ、白术内酯Ⅰ、党参炔苷、紫丁香苷、去氢土莫酸、土莫酸、去氢茯苓酸、茯苓酸平均加样回收率分别为98.54%、97.91%、100.01%、96.99%、99.06%、97.06%、98.47%、99.59%，RSD 分别为1.28%、1.38%、0.99%、1.47%、0.83%、0.88%、1.10%、1.02%。

2.9 样品含有量测定 取3 批本品，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，在“2.1”项色谱条件下进样测定，计算含有量，结果见表2。

表2 各成分含有量测定结果（mg／g， n＝3）Tab.2 Results of content determination of various consitituents（mg／g， n＝3）

3 讨论

3.1 指标成分选择 健儿膏中党参健脾益肺、养血生津，为方中君药；炒白术健脾益气，山药补脾养胃，黄芪补气升阳，炒白扁豆化湿和中，共为臣药；茯苓健脾渗湿，炒麦芽消食导滞，大枣益气安神，陈皮理气健脾，共为佐药；甘草补脾益气、调和诸药，为使药，诸药合用，共奏健脾益气、和胃调中之功效。参考中药质量标志物以君药为主，同时兼顾臣药、佐药和使药的原则，本实验选择健儿膏方中君药党参、臣药炒白术、佐药茯苓进行研究。党参主要含有多糖、聚炔类、酚酸、木脂素等多种成分［12］，党参炔苷是其保护胃黏膜的主要活性成分［13］，也是表征成分，而紫丁香苷具有抗疲劳、抗脑缺血、增强适应性等药理作用［14-15］；炒白术缓和燥性，增强健脾益气功效，主要含有内酯、挥发油，其中白术内酯Ⅲ、白术内酯Ⅰ等内酯类成分具有抗炎、调节胃肠道、促进营养物质吸收的功效［16］；茯苓主要含有多糖、三萜，其中去氢土莫酸、土莫酸、去氢茯苓酸、茯苓酸等三萜酸类成分，具有明显的抗炎、免疫调节作用［17］。

3.2 流动相选择 本实验考察了流动相甲醇-水［7］、乙腈-水［8］、甲醇-0.05% 磷酸［6］、乙腈-0.05%磷酸［10-11］、乙腈-0.05% 甲酸［9］，以各成分分离效果、峰形、色谱图基线平稳情况、分析时间为指标，最终确定乙腈-0.05% 磷酸作为流动相，按“2.1”项下比例进行梯度洗脱。

4 结论

本实验建立HPLC 法同时测定健儿膏中白术内酯Ⅲ、白术内酯Ⅰ、党参炔苷、紫丁香苷、去氢土莫酸、土莫酸、去氢茯苓酸、茯苓酸的含有量，可用于该制剂更全面的质量控制，也能为其相关标准的提高和完善提供参考依据。