刘录明，王 玲，何宝珍，吴 彪

（1.海南三林旅业开发有限公司澄迈富力红树湾医院内科，海南澄迈 571926；2.海南省人民医院内科，海口 570311）

急性心肌梗死（acute myocardial infarction，AMI）是冠状动脉粥样硬化性心脏病（冠心病）中最严重的一种心血管疾病，具有发病急骤、病情进展迅速和致死率较高的特点，严重威胁人类的生命健康［1］。微小核糖核酸（microRNA，miR）对心肌细胞功能具有调节作用，其表达异常可能与心血管疾病的发生、发展密切相关，并有望成为诊断AMI 潜在的生物标志物［2-3］。近年来研究发现，miR-302b 与心血管疾病关系密切，参与心肌损伤的发生、发展，并起着重要的基因调控作用［4］。为此，本研究通过检测老年AMI 患者血清miR-302b的浓度，分析其对AMI 的诊断价值，旨在为早期预测老年AMI 发生提供参考依据。

1 资料和方法

1.1 一般资料

选取2015 年1 月至2018 年10 月海南三林旅业开发有限公司澄迈富力红树湾医院和海南省人民医院收治的老年AMI 患者136 例，其中男86 例，女50 例，年龄（72.15±7.46）岁。纳入标准：（1）符合世界卫生组织心肌梗死诊断和治疗指南制定的标准［5］；（2）在发病12 h 内采集血样。排除标准：（1）陈旧性心肌梗死病史、慢性心力衰竭及心功能不全病史患者；（2）急性心肌炎、肺源性心脏病、阻塞性肺部疾病及重度感染患者；（3）恶性肿瘤、严重肝及肾功能不全及自身免疫性疾病患者；（4）近期有脑血管事件、重大外伤及手术的患者等。另选取同期来我院体检健康者50 名作为对照组，男34 名，女16 名，年龄（61.50±7.28）岁。本研究经医院伦理委员会批准，并与所有研究对象签署知情同意书。

1.2 观察指标

所有研究对象均于空腹抽取静脉血5 mL 置于未加抗凝剂的离心管中，离心分离血清，-80℃低温冰箱保存待测。应用TaqMan MicroRNA Reverse Transcription 试剂盒逆转录已定量的RNA，选用U6 作为内参，反应体系为15 μL，反应参数：16℃30 min；42℃30 min，85℃5 min。在ABI 7500型荧光定量聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）仪（美国ABI 公司）上进行实时荧光定量PCR（real-time quantitative PCR，RT-PCR）。反应体系为20 μL：TaqMan MicroRNA Assay 1.00 μL，cDNA 1.33 μL，TaqMan 2×Universal PCR Master Mix 10.00 μL，ddH2O 7.67 μL，混合后离心放入定量PCR 仪。扩增条件：95℃预热10 min，95℃变性15 s，60℃退火60 s，45 个循环，最后38℃延伸5 s，实验重复3 次。以U6 为内参照，采用2-△△Ct法计算miR 的相对浓度，其中△Ct=Ct 目的基因-CtU6。心肌肌钙蛋白I（cardiac troponin I，cTnI）采用化学发光法，在贝克曼DXI800 型全自动免疫分析仪上检测；总胆固醇（total cholesterol，TC）、三酰甘油（triglyceride，TG）、低密度脂蛋白胆固醇（low-density lipoprotein cholesterol，LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（high-density lipoprotein cholesterol，HDLC）及肌酸激酶同工酶（creatine kinase isoenzyme，CK-MB）浓度检测采用贝克曼AU5800 型全自动生化分析仪及配套试剂，操作过程中均严格按照仪器及试剂说明书进行。

1.3 统计学分析

采用SPSS 20.0 统计软件分析数据。计量资料以（）表示，组间比较采用t检验，组内比较采用重复测量的方差分析。计数资料以［n（%）］表示，组间比较采用χ2检验。绘制受试者工作特征曲线（receiver operating characteristic curve，ROC）分析miR-302b、cTnI 及CK-MB 对老年AMI 诊断的价值，曲线下面积（area under curve，AUC）的比较采用Z检验。以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 2 组受试者临床基线资料比较

AMI 组和对照组受试者的性别、年龄、体质量指数、收缩压、舒张压、吸烟史、高血压史、糖尿病史、高脂血症及血清TC、TG、LDL-C 及HDL-C 浓度比较，差异均无统计学意义（P＞0.05），详见表1和表2。

表1 AMI 组和对照组受试者计量基线比较 ［±s］

表1 AMI 组和对照组受试者计量基线比较 ［±s］

表2 AMI 组和对照组受试者计数基线比较 ［n（%）］

2.2 2 组受试者血清miR-302b、cTnI 及CK-MB浓度比较

AMI组血清miR-302b、cTnI及CK-MB浓度均明显高于对照组，差异均有统计学意义（P＜0.01），详见表3。

2.3 miR-302b、cTnI、CK-MB 及三项联合诊断老年AMI 的价值

miR-302b、cTnI 及CK-MB诊断AMI的临界值分别为2.64、1.48 ng/mL、60.75 U/L。三项联合诊断老年AMI 的AUC（95%CI）明显高于单项miR-302b、cTnI或CK-MB，差异有统计学意义（Z=4.872，4.563，7.628，P＜0.05），其敏感度和特异度为94.6%和89.0%。miR-302b 及cTnI 诊断老年AMI 的AUC相当，而且均明显高于CK-MB，差异有统计学意义（Z=6.275，6.613，P＜0.05），详见表4 和图1。

表3 AMI 组和对照组受试者血清miR-302b、cTnI 及CK-MB 浓度比较 ［±s］

表3 AMI 组和对照组受试者血清miR-302b、cTnI 及CK-MB 浓度比较 ［±s］

表4 miR-302b、cTnI、CK-MB 及三项联合老年诊断AMI 的价值

3 讨论

AMI 是临床上常见的急危重症，早期诊断及早期干预可有效改善患者的预后。目前cTnI、CK-MB 等传统心肌损伤标志物在AMI 的诊疗中发挥着重要的作用，但这些标志物诊断AMI 的敏感度和特异度不高［6］。因此，仍然有必要进一步挖掘新的心肌损伤标志物，以期为AMI 的早期诊断、早期治疗提供有利的佐证。近期研究表明，miR 在细胞增殖、分化、发育及死亡过程中发挥重要作用，有可能作为诊断心肌病变的新型潜在生物标志物，也为AMI 的发生机制提供了研究的新思路［7］。cTnI 是心肌特有的结构蛋白，对心肌损伤有高度敏感性和特异性，是欧洲和美国指南中诊断AMI 的首选生物学标志物［8］。AMI 患者的心肌发生坏死时，cTnI 才会释放到血液中，而miR 可以稳定存在于血液中，比cTnI 更早释放入血液。CK-MB 是一种与心肌梗死密切相关的酶类，也是临床上诊断AMI 的常用指标，但其在早期AMI 预测中的效能具有一定局限［9］。

本研究结果显示，miR-302b 的表达未受增龄因素影响，AMI 组血清miR-302b、cTnI 及CK-MB浓度均明显高于对照组，提示血清miR-302b 在老年AMI 患者中高表达，其可能参与AMI 的发生、发展。陈劲松等［10］对73 例AMI 患者，49 例不稳定型心绞痛患者和29 例健康老人血清miR 进行分析，结果显示血清miR 在老年AMI 患者中的表达明显升高，高表达miRNA 可能与心肌损伤或者坏死有关。Guo 等［11］研究发现，AMI 患者外周血中的miR浓度显著升高，与cTnI、CK-MB 均呈正相关，而且miR 达峰时间早于cTnI 及CK-MB，可作为AMI 早期诊断的一种新的生物学标志物。本研究ROC分析结果显示，miR-302b 及cTnI 诊断老年AMI 的AUC 相当，而且均明显高于CK-MB，三项联合诊断老年AMI 的AUC（0.933，95%CI：0.870～0.982）最大，其敏感度和特异度为94.8%和89.2%。说明miR-302b 有望作为诊断老年AMI 的潜在标志物，与cTnI 及CK-MB 三项联合检测有助于提高老年AMI 诊断的准确性。Yang 等［12］研究表明，血清miR-302b 是诊断AMI 的新型生物标志物，在未来有广阔的应用前景。因此，患者被高度怀疑AMI，且cTnI、CK-MB 浓度升高不明显时，应当检测其血清miR-302b 浓度。

综上所述，血清miR-302b 浓度在老年AMI 患者中明显升高，其诊断老年AMI 的效能与cTnI相当，可作为诊断老年AMI 的生物学标志物，miR-302b 与cTnI、CK-MB 联合检测有助于提高老年AMI 诊断的敏感度和特异度。但目前在临床实践中还缺乏随访大样本资料支持，miR 的分析技术与结果判断标准不统一，三项联合是否应成为常规，未来仍需更多的临床试验研究以进一步证实miR-302b 在AMI 中的临床应用价值。