张清华，刘 燕

（山东省药学科学院，山东 济南 250101）

复方黄葵颗粒的源处方是山东中医药大学附属医院主任医师张兆峰教授治疗前列腺炎的经验方，具有清热解毒，利湿清浊，活血通络，散瘀止痛的功效，专为湿热下注所致的慢性前列腺炎及前列腺增生症所设[1]。本药的开发有望提供一种安全有效、价格低廉、服用方便的中成药制剂，以解除广大前列腺炎患者的病苦。为控制本品质量，保证临床疗效，对本品进行了质控研究。

1 仪器与试药

1.1 仪器

高效液相色谱仪，Waters 600E泵，2996PDA检测器，717plus自动进样器（美国Waters公司）；Zorbax SB-C18（4.6 mm×150 mm，5 µm）不锈钢柱；Zorbax Eclipse XDB-C18（4.6 mm×150 mm，5µm）不锈钢柱。

1.2 试药

金丝桃苷对照品（中国食品药品检定研究院）；虎杖苷对照品（中国食品药品检定研究院）；乙腈（色谱纯，天津科密欧）；磷酸（分析纯，天津科密欧）；柠檬酸（分析纯，天津科密欧）。

2 金丝桃苷含量测定研究[2-4]

2.1 溶液的制备

2.1.1 对照品溶液的制备 取金丝桃苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 ml中含金丝桃苷100 μg的溶液，即得。

2.1.2 供试品溶液的制备 取样品适量，研细，取约0.7 g，精密称定，置入25 ml量瓶，加甲醇15 ml，超声（功率100 W，频率40 kHz）处理30 min，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

2.1.3 阴性对照液的制备 将处方中除去黄蜀葵花，按处方比例及制备工艺，制成阴性样品，按供试品溶液制备方法制成阴性对照液。

2.2 色谱条件

色谱柱：Zorbax SB-C18（4.6 mm×150 mm，5µm）不锈钢柱；柱温：35 ℃；流速：1.0 ml/min；检测波长：360 nm；流动相：乙腈-0.5 %柠檬酸（14:86）。对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液的高效液相色谱（HPLC）图见图1。

2.3 线性关系的考察

取金丝桃苷对照品5 mg，精密称定，置入10 ml量瓶，加甲醇适量，超声处理使溶解，加甲醇至刻度，摇匀，作为对照品贮备液，分别精密量取0.20，0.40，0.80，1.0，2.0 ml，置入5 ml量瓶，加甲醇至刻度，摇匀，作为对照品溶液；分别精密吸取上述对照品贮备液及对照品溶液各10 µl，注入液相色谱仪，记录色谱图及峰面积。以对照品溶液浓度C（μg/ml）为横坐标，峰面积（A）为纵坐标，进行线性回归，得回归方程为A=22 869C-32 081，相关系数r=0.999 99。由回归方程和标准曲线可见，金丝桃苷对照品浓度在20.76～519.0 µg/ml范围内与其峰面积呈良好的线性关系。

图1 对照品溶液（A）、供试品溶液（B）及阴性对照液（C）的色谱图

2.4 稳定性试验

分别精密吸取同一对照品溶液和供试品溶液各10 µl，分别于0，1，2，4，8，12，24 h进样。对照品溶液和供试品溶液峰面积RSD分别为0.14 %，0.32 %，表明二者在24 h内稳定。

2.5 精密度试验

精密吸取同一对照品溶液10 µl，连续进样6次，其峰面积RSD为0.10 %，表明本方法具有较好的精密度。

2.6 重复性试验

取批号为20170618的样品，按2.1.2项下方法制备6份供试品溶液，依法测定含量，平均值为15.92 mg/袋，RSD为0.57 %。结果表明，本方法具有较好的重复性。

2.7 回收率试验

取本品细粉（批号：20170618，含量为15.92 mg/袋）9份，分为3组，每组3份，每组取样量分别为0.21，0.26，0.31 g，精密称定，分别精密加入金丝桃苷对照品溶液（0.7010 mg/ml）1.0，0.8，1.2 ml，按2.1.2项下方法制备9份供试品溶液，依法测定含量，结果见表1。结果显示，本方法具有较好的回收率。

表1 回收率试验结果

2.8 样品测定

按2.1.2项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定3批样品，3批样品（批号：20170618，20170619，20170620）金丝桃苷平均含量分别为15.59，16.01，14.30 mg/袋。

3 虎杖苷含量测定研究[5-6]

3.1 溶液的制备

3.1.1 对照品溶液的制备 取虎杖苷对照品适量，精密称定，加稀乙醇制成每ml中含虎杖苷40 µg的溶液，即得。

3.1.2 供试品溶液的制备 取样品适量，研细，取细粉约2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇25 ml，密塞，称定重量，超声处理30 min，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

3.1.3 阴性对照液的制备 将处方中除去虎杖，按处方比例及制备工艺，制成阴性样品，按3.1.2项下方法制成阴性对照液。

3.2 色谱条件

色谱柱：Zorbax Eclipse XDB-C18（4.6 mm×150 mm，5 µm）不锈钢柱；柱温：35 ℃；流速：1.0 ml/min；检测波长：306 nm；流动相：乙腈-0.05 %磷酸（11:89）。对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液的色谱图见图2。

图2 对照品溶液（A）、供试品溶液（B）及阴性对照液（C）色谱图

3.3 线性关系的考察

取虎杖苷对照品10 mg，精密称定，置入25 ml量瓶，加稀乙醇适量，超声处理使溶解，加稀乙醇至刻度，摇匀，作为对照品贮备液，从中分别精密量取0.20，0.50，1.0，2.0，2.5，5.0 ml，置入10 ml量瓶，加稀乙醇至刻度，摇匀，作为对照品溶液；分别精密吸取上述对照品溶液各10 µl，注入液相色谱仪，记录色谱图及峰面积。以对照品溶液浓度C（µg/ml）为横坐标，峰面积（A）为纵坐标，进行线性回归，得回归方程为A=45 495C-51 856，相关系数r=0.9998。通过回归方程和标准曲线可以看出，虎杖苷对照品浓度在7.776～194.4 µg/ml范围内与其峰面积呈良好的线性关系。

3.4 稳定性试验

分别精密吸取同一对照品溶液和供试品溶液各10 µl，分别于0，1，2，4，8，12，24 h进样，其峰面积分别为0.37 %，0.31 %。结果表明，对照品溶液和供试品溶液在24 h内稳定。

3.5 精密度试验

精密吸取同一对照品溶液10 µl，连续进样6次，其峰面积值RSD为0.30 %。结果表明，本方法具有较好的精密度。

3.6 重复性试验

取批号为20170618的重量差异项下的本品，按3.1.2项下供试品溶液制备方法制备6份供试品溶液，依法测定含量，平均值为2.78 mg/袋，RSD为0.64 %。结果表明，本方法具有较好的重复性。

3.7 回收率试验

取批号为20170618的本品细粉（含量为2.78 mg/袋）9份，分为3组，每组3份，每组取样量分别为0.58，0.72，0.86 g，精密称定，分别精密加入虎杖苷对照品溶液（0.3850 mg/ml）0.64，0.8，096 ml，按3.1.2项下方法制备9份供试品溶液，依次测定，结果见表2。结果显示，本方法具有较好的回收率。

3.8 样品测定

按3.1.2项下供试品溶液制备方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定3批样品（批号：20170618，20170619，20170620），虎杖苷含量分别为15.59，16.01，14.30 mg/袋。

表2 回收率试验结果

4 结论

4.1 2015年版中国药典收载了本品的君药黄蜀葵花，并在含量测定项下采用高效液相色谱法（HPLC）测定金丝桃苷的含量，因此本品增加了金丝桃苷的含量测定。结果表明，超声提后取续滤液直接进样，方法简便，具有较好的准确度和精密度，且阴性对照液无干扰，可作为本制剂的质控方法。

4.2 采用超声提取，取续滤液直接进样，经HPLC测定本品中虎杖苷含量，方法简便，具有较好的准确度和精密度，且阴性对照无干扰，可作为本制剂的质控方法。