HPLC测定参苓白术丸中人参皂苷的含量

2020-03-10王登旭赵文法王洪梅

食品与药品 2020年1期

王登旭，赵文法，王洪梅

（1.聊城市药品不良反应监测中心，山东聊城 252000；2.聊城市食品药品检验检测中心，山东聊城252000）

参苓白术丸收载于《中国药典》2015年版一部[1]，是由人参、茯苓、白术（麸炒）、山药、白扁豆（炒）、莲子、薏苡仁（炒）、砂仁、桔梗、甘草10味中药制成的水丸，具有补脾胃，益肺气之功效。临床主要用于脾胃虚弱，食多便溏，气短咳嗽，肢倦乏力，该品种经多年的临床验证，证明疗效显著。本品现行质量标准中仅收载人参的薄层色谱鉴别，不能完全反应其产品质量。为有效控制产品质量，本研究采用高效液相色谱法（HPLC）对参苓白术丸主要成分人参中的人参皂苷Rg1、Re和Rb1进行定量控制。本研究参考国内外有关资料[2-7]，经多次试验,建立了HPLC测定参苓白术丸中人参皂苷含量的新方法,实验结果表明该方法准确、简单、快捷、重现性好。

1 仪器与试药

1.1 仪器

AE240型电子分析天平（瑞士Mettler）；Agilent1200高效液相色谱仪（配DAD检测器，美国安捷伦）；HU6150B超声波清洗器（天津恒奥）。

1.2 试药

人参皂苷Rg1对照品（批号：110703-201832，中国食品药品检定研究院）；人参皂苷Re对照品（批号：110754-201827，中国食品药品检定研究院）；人参皂苷Rb1对照品（批号：110704-201827，中国食品药品检定研究院）；乙腈（色谱纯，天津大茂）；水为超纯水，其他试剂均为分析纯；样品为市售，阴性样品为自制。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

2.1.1 色谱条件色谱柱为Thermo ODS C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按表1进行梯度洗脱；检测波长为203 nm；流速为1.0 ml/min；柱温为30 ℃；进样量为10 μl。

表1 梯度洗脱表

2.1.2 系统适用性试验取供试品溶液10 μl，照2.1.1项下色谱条件注入液相色谱仪，理论板数按人参皂苷Rg1峰计算应不低于4000，人参皂苷Rg1与相邻峰的分离度均大于1.5。

2.2 溶液制备

2.2.1 对照品溶液制备精密称取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Re对照品及人参皂苷Rb1对照品，加甲醇溶解并定量稀释制成每l ml各含0.2 mg的混合溶液，摇匀，即得。

2.2.2 供试品溶液制备取本品10袋，粉碎，混匀，取约10 g，精密称定，置索氏提取器中，加三氯甲烷50 ml，加热回流3 h，药渣挥去溶剂，连同滤纸筒移入具塞锥形瓶中，加入2 %氢氧化钾甲醇溶液50 ml，加热回流1 h，放冷，滤过，用少量甲醇洗涤药渣及容器3次，合并洗液和滤液，蒸干，残渣加水50 ml使溶解，用水饱和的正丁醇提取4次（20 ml，20 ml，10 ml，10 ml），合并正丁醇提取液，分别用氨试液、1 % 磷酸二氢钾溶液、正丁醇饱和的水各40 ml洗涤，弃去洗涤液，正丁醇液置旋转蒸发仪中减压蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.3 阴性对照溶液制备按处方工艺制备不含人参的阴性样品，照2.2.2项下方法操作，即得。

2.3 专属性考察

取混合对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各10 μl，分别注入液相色谱仪中，照2.1.1项下色谱条件测定。结果供试品溶液在与混合对照品溶液相同保留时间处有色谱峰，阴性对照溶液无干扰峰，说明方法专属性好，见图1。

图1 混合对照品溶液（A）、阴性对照溶液（B）、供试品溶液（C）HPLC图谱

2.4 线性范围考察

精密称取人参皂苷Rg1对照品0.02010 g、人参皂苷Re对照品0.02019 g及人参皂苷Rb1对照品0.02036 g，置25 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为混合对照品储备液。精密吸取混合对照品储备液0.5，1.0，2.0，5.0 ml，分别置10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，得系列标准溶液。照2.1.1项下色谱条件，取对照品储备液及系列标准溶液各10 μl，分别注入液相色谱仪，用峰面积（A）对浓度（C）进行线性回归，结果表明，人参皂苷Rg1在0.0402～0.804 mg/ml浓度范围内线性关系良好，线性回归方程为A=5082.3C-6.6572，r=0.9995；人参皂苷Re在0.04038～0.8076 mg/ml浓度范围内线性关系良好，线性回归方程为A=4849.5C+16.458，r=0.9997；人参皂苷Rb1在0.04072～0.8144 mg/ml浓度范围内线性关系良好，线性回归方程为A=5541.7C-5.0939，r=0.9999。