★ 周媛媛 李中南

（1.安徽中医药大学 合肥 230038；2.安徽中医药大学第一附属医院 合肥 230031）

随着人们生活水平的提高和饮食结构的改变，我国糖尿病和痛风的患病率逐年上升，严重影响人们的生活质量。两病的发生与高血脂、高血压、肥胖、遗传等息息相关，且两病之间可互相影响，互为危险因素［1］。前列腺素（prosta-glandins，pGs）是花生四烯酸（rachidonicacid）的代谢产物,它是炎症反应的重要介质，可诱发人和动物的急性炎症反应,其中前列腺素E2（prostaglandin E2，PGE2）起着重要的作用。环氧化酶（cyclooxygenase，COX）是花生四烯酸转化为PGE2 的关键酶，COX-2 作为其中一个亚型，在受到刺激时表达迅速上调，参与多种病理生理过程。本文旨在观察中药萆苓方对糖尿病痛风模型大鼠血清中PGE2、COX-2 表达水平的影响，探讨萆苓方治疗糖尿病合并痛风的作用机制。

1 材料和方法

1.1 实验动物 取清洁级健康SD 雄性大鼠50 只，体重（180±20）g，购自于安徽医科大学动物实验中心，许可证号scxk（皖）2017001。大鼠饮食、活动正常，皮毛光泽，反应灵敏。饲养房室内温度25℃～30℃，相对湿度40%～70%，空气流通。

1.2 试药 萆苓方（由萆薢、土茯苓、泽泻、黄柏、苍术、怀牛膝、威灵仙、虎杖、薏苡仁、当归、土鳖虫等药物组成，安徽中医药大学第一附属医院药物制剂中心提供）；吲哚美辛片（上海新黄河制药有限公司，药准字号：H31020148，产品批号：01717004）；吡格列酮（江苏德源药业股份有限公司，批准文号:H20110048）；尿酸钠（上海源叶生物科技有限公司，批号：S16N8I46625）；吐温80（上海源叶生物科技有限公司，批号：M19A6K2526）；链脲佐菌素（STZ）（美国Sigma 公司，批号：20160805426）；PGE2 试剂盒（北京安迪华泰科技有限公司，批号：20180412）；COX-2 试剂盒（北京安迪华泰科技有限公司，批号：20180412）。

1.3 主要仪器 血糖监测仪（美国强生公司，型号：稳豪型）；酶标仪（雷杜公司，型号：RT-6000）；高速台式冷冻离心机（安徽嘉文仪器装备有限公司，型号：JW3021HR）；漩涡混合器（其林贝尔仪器制造公司，型号：GL-88B），移液器（Eppendorf公司，型号：0.5～1000μL），排枪（Eppendorf 公司，型号：50～300μL），电热恒温箱（上海三发公司 型号：DNP-9052BS-Ⅲ）。

1.4 糖尿病模型制作 选取健康雄性SD 大鼠45只，体重（180±20）g。适应性喂养1 周后，按数字表法随机选出9 只作为正常组，予基础饲料喂养，其余作为实验组，给予高脂饲料（蛋白质15%、脂肪20%、碳水化合物50%、胆固醇5%、猪油10%）喂养。4 周后造模，造模前禁食不禁水12h，临用前将pH4.5 的柠檬酸缓冲液与STZ 配制成1%浓度的STZ 溶液，模型组及各药物组按35mg/kg 单次腹腔注射STZ 溶液，正常组按此用量折算出相当量的生理盐水注射一次。72h 后尾静脉取血测血糖，以血糖≥16.7mmol/L 作为糖尿病成模的标准［2-3］。

1.5 痛风关节模型制作 糖尿病模型成功后，大鼠给药4 天，第四天除正常组外，每只实验鼠均选右侧踝关节外后方为穿刺点，针口斜面朝前上方与胫骨成45 度夹角穿入踝关节腔，以4 号针头向关节腔注入0.2mL 尿酸钠溶液（取250mg 尿酸钠结晶，加入45mL 0.9%氯化钠注射液，再加5mL 吐温80，加热搅拌，配成5g/L 的尿酸钠溶液）一次，以关节囊对侧鼓起为注入标准，诱导痛风模型［4］。正常组注射等量生理盐水。

1.6 分组及给药 将成模的实验组大鼠随机分为模型组、萆苓方组、吲哚美辛组、吡格列酮组，萆苓方组按10g/kg、吲哚美辛组按5mg/kg、吡格列酮组按15mg/kg 给药，正常组、模型组予等量生理盐水，每日灌胃1 次，连续3 周。期间剔除未成模大鼠2 只，因感染死亡大鼠3 只。

1.7 观察指标 大鼠连续给药3 周，并监测动物体重变化。末次给药后禁食12h，处死前称体重，以10%水合氯醛按3.5mL/kg 腹腔注射麻醉，立即取腹主动脉血，送至安徽中医药大学第一附属医院生化室测定血糖、血尿酸、PGE2、COX-2。

1.8 统计学方法 实验数据采用SPSS21.0 软件进行统计学处理，计量资料的数据用 表示，两组比较采用t 检验进行处理，组间比较采用方差分析，P＜0.05 为差异有统计学意义，并做相关性分析。

2 结果

2.1 对大鼠体重的影响 见表1。结果提示：大鼠造模后，模型组、吡格组、萆苓组、吲哚组大鼠体重均低于正常组（P＜0.05 或P＜0.01），治疗后3 周后，吡格组、萆苓组大鼠体重明显高于模型组（P＜0.05），组间比较，萆苓组与吡格组疗效相近（P＞0.05），吡格组疗效明显优于吲哚组（P＜0.05）。

表1 对大鼠体重的影响（，n=9） g

表1 对大鼠体重的影响（，n=9） g

注：与正常组比较，#P＜0.05，##P＜0.01；与模型组比较，*P＜0.05；与吲哚组比较，△P＜0.05。

组别 造模前 治疗1 周后 治疗2 周后 治疗3 周后正常组 199.78±14.76 209.89±13.36 220.44±11.59 229.56±10.89模型组 200.44±10.79 190.33±12.43## 178.11±11.33 170.56±9.68吡格组 199.67±12.35 196.33±12.29# 192.56±13.86 189.00±17.21*△萆苓组 200.67±12.47 195.44±13.76# 190.00±13.97 184.44±15.13*吲哚组 201.11±12.34 194.44±12.15# 185.78±12.29 174.22±11.29

2.2 对大鼠血糖、血尿酸的影响 见表2。结果提示：与正常组相比，模型组、各药物组大鼠血糖明显升高（P＜0.01），与模型组相比，治疗后萆苓组、吡格组大鼠血糖明显降低（P＜0.05 或P＜0.01），组间比较，萆苓组、吡格组疗效优于吲哚组（P＜0.05）；与正常组相比，模型组血尿酸明显升高（P＜0.01），与模型组比较，萆苓组、吲哚组大鼠血尿酸明显降低（P＜0.01），组间比较，萆苓组、吲哚组疗效相近（P＞0.05），且明显优于吡格组（P＜0.01）。

表2 对大鼠血糖、血尿酸的影响（，n=9）

表2 对大鼠血糖、血尿酸的影响（，n=9）

注：与正常组比较，##P＜0.01；与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；组间比较，△P＜0.05，△△P＜0.01。

组别疗前血糖/mmol·L-1疗后血糖/mmol·L-1血尿酸/μmol·L-1正常组 5.72±0.97 5.76±0.80 73.00±7.31模型组 18.13±2.27## 17.55±3.14 144.25±25.35##吡格组 16.45±3.72## 12.71±2.18**△ 138.25±15.82萆苓组 16.06±2.19## 14.00±2.32*△ 92.86±17.25**△△吲哚组 17.46±2.06## 15.19±1.28 90.88±22.04**△△

2.3 对大鼠PGE2、COX-2 的影响 见表3。结果提示：与正常组相比,模型组COX-2、PGE2 的含量明显升高（P＜0.01），与模型组相比，各药物组COX-2、PGE2 的含量明显降低（P＜0.01），组间比较，吲哚组与萆苓组COX-2、PGE2 疗效相近（P＞0.05），优于吡格组（P＜0.01）。

表3 对大鼠PGE2、COX-2的影响（，n=9）ng/L

表3 对大鼠PGE2、COX-2的影响（，n=9）ng/L

注：与正常组比较，##P＜0.01；与模型组比较，**P＜0.01；与吡格组比较，△P＜0.05

组别 COX-2 PGE2 正常组 59.86±4.62 81.34±2.48模型组 145.72±12.35## 324.16±20.10##萆苓组 86.82±3.55**△ 145.69±10.33**△吡格组 107.18±10.93** 199.86±16.12**吲哚组 82.86±3.39**△ 142.09±14.69**△

2.4 相关分析 经分析显示，高血糖与高血尿酸具有相关关系，相关系数r=0.346（P＜0.05）；高血糖与COX-2 有显著相关性，相关系数r=0.634（P＜0.01）；高血糖与PGE2 有显著相关性，相关系数r=0.652（P＜0.01）；高尿酸与COX-2 的具有相关性，相关系数r=0.732（P＜0.01）；高尿酸与PGE2 相关性，r=0.750（P＜0.01）；COX-2 与PGE2具有显著相关性，r=0.945（P＜0.01）。

3 讨论

有研究表明，糖尿病和痛风有共同的发病基础，血尿酸增高可加重糖尿病患者的代谢紊乱［5］，痛风合并糖尿病患者的血尿酸水平也比单纯痛风患者更高［6］。因此，能够同时改善高血糖与高血尿酸水平的药物，对于提高疗效，改善患者依从性，具有重要意义。本实验正是探讨了中药萆苓方对于血糖、血尿酸及PGE2、COX-2 的影响。

前列腺素作为是花生四烯酸的代谢产物,能保护胃和十二指肠粘膜,维护肾及血小板功能,但也可诱发人和动物的急性炎症反应。当细胞膜上磷脂酶A2 （phoshPolipaseA2）受到致炎因子等某种因素的刺激时,释放花生四烯酸，在环氧化酶的作用下，产生大量PGE2，引起并加重一系列炎症反应，促使局部毛细血管扩张，血管通透性增加，组织充血水肿，加重疼痛［7-11］，还可导致胰岛 β 细胞的功能障碍［12］，影响胰岛素的分泌。本次实验显示，模型组PGE2 的含量明显升高（P＜0.01），药物治疗后，萆苓组PGE2 的含量明显降低（P＜0.01）。表明萆苓方可通过降低PGE2 的水平，减轻炎症反应，缓解糖尿病痛风的临床症状，降低血糖、血尿酸水平。

环氧化酶-2 是环氧化酶的一个亚型，研究表明［13］，其在正常状态下几乎不表达，一旦受到刺激如外伤、炎症后迅速合成，增加血管通透性，产生炎性因子，诱导巨噬细胞趋化，激活基质金属蛋白酶，活化白细胞和血小板，且能降低人体对胰岛素的敏感性。另一方面，COX-2 作为PGE2 的限速酶，与PGE2 有交互作用，它催化花生四烯酸转化为PGE2，诱导炎性反应，抑制胰岛β 细胞的功能。本次实验表明，模型组COX-2 的表达明显升高（P＜0.01），给药后，萆苓组COX-2 的含量明显降低（P＜0.01）。说明萆苓方可通过抑制COX-2的高表达，缓解炎症反应，改善胰岛功能，达到降糖降尿酸的作用。此可能是萆苓方降糖降尿酸的机制之一。

实验中采用链脲佐菌素诱导糖尿病模型，成模后各实验组大鼠较正常组大鼠出现明显多饮、多食、多尿症状，且体重明显低于正常组（P＜0.05或P＜0.01）。药物治疗后3 周，吡格列酮组、萆苓组大鼠“三多”症状改善，体重明显高于模型组（P＜0.05）。说明萆苓方可明显改善糖尿病的临床症状。

相关分析显示，高血糖与高血尿酸具有相关关系，表明二者之间相互影响，互为危险因素。与COX-2、PGE2 有显著相关性，证实高血糖、高血尿酸均与炎症因子有关，COX-2 及PGE2 参与其中，互为因果，加重了对机体的损害。

糖尿病属中医“消渴”范畴，痛风属中医“痹病”“白虎历节”范畴，其发病多与感受外邪、饮食不节、遗传等因素有关，其病机为本虚标实，本虚乃脾肾亏虚，脏腑功能衰弱，标实为湿瘀毒互结，阻滞气血经络。萆苓方正是以清热利湿，泻浊解毒，活血止痛立法。方中土茯苓、泽泻、萆薢、薏苡仁利湿泻浊；威灵仙祛风湿，通经络；黄柏、苍术清热燥湿解毒；当归、虎杖、土鳖虫活血止痛；怀牛膝补肝肾，强筋骨，利关节。

综上所述，本方通过降低COX-2、PGE2 的高表达，消除炎症反应，保护胰岛功能，发挥良好的调节血糖、血尿酸、改善糖尿病痛风症状的作用。