郑金贤

【摘 要】目的：建立液-质联用法（HPLC-MS）同时检测小麦粉中的细交链孢酶酮酸（TeA）、铰链孢酚（AOH）、腾毒素（TEN）和铰链孢酚单甲醚（AME）;对青海省小麦粉中交链孢霉毒素污染状况进行分析。方法：由于样品溶液存在基质效应，选用酸性条件下的磷酸盐缓冲液作为混合提取液，上样溶液的有机试剂含量在14%左右（<20%），采用空白基质加标工作曲线，同位素稀释结合固相萃取技术，以液相色谱-质谱/质谱进行定性、定量。结果：该方法4种交链孢霉毒素（TeA、AOH、TEN、AME）的回收率试验范围在83.1%-116.0%，相对标准偏差范围在1.24%-2.99%，结论：该方法精密度、回收率符合实验室质量控制规范食品理化检验GB/T27404-2008方法确认的技术要求，以此法测定小麦粉中交链孢霉毒素的含量，结果比较满意。

【關键词】小麦粉;交链孢霉毒素;研究分析;污染状况

【中图分类号】R65【文献标识码】A【文章编号】1005-0019（2020）04--02

交链孢霉毒素分布广泛，其有毒代谢产物污染农作物的情况相当普遍，但是由于人们平均每日的摄入量很低，未能引起足够重视[1]。虽然食用含小量毒素的食品不会引起急性中毒，但是长期食用有可能引起慢性中毒[2]。本文首先建立HPLC-MS同时检测小麦粉中的TeA、AOH、TEN和AME，现将结果报告如下：

一、 实验部分

1.1 材料与方法

1.1 试剂与仪器

混合标准工作液（TeA和AOH：1.0μg/mL，TEN和AME：0.1μg/mL）：（sigma）;碳酸氢铵溶液（1.0mmol/L）、0.05mol/L磷酸二氢钠溶液（pH3.0）、乙腈（MERCK，色谱级）;甲酸（DikmaPure，色谱级）;水（超纯水）;0.22um微孔滤膜。

液相色谱-串联质谱仪，AB3200Q-TRAP（带电喷雾离子源）;HLB固相萃取柱;分析天平（感量0.1mg;）;氮吹仪;漩涡混悬器。

1.2 SPE净化条件

HLB柱依次用5mL甲醇和5mL水活化。将稀释后的样品提取液水活化。将稀释后的样品提取液全部过柱，再用5mL20%5mL甲醇溶液淋洗，于负压状态下抽干柱子5min。依次用5mL甲醇和5mL乙腈洗脱，抽干柱子合并液洗脱液，抽干柱子合并洗脱液于小试管中，45℃水浴氮吹近干，残渣先用200?L甲醇复溶，涡旋、混匀、复溶，涡旋混匀30s，再加水1.8mL，涡旋混匀30s，于12000r/min低温（4℃）离心10min，上清液供LC-MS/MS分析。

1.3 色谱条件

色谱柱：WatersUPLCBEHC18柱（2.1mm×100mm，1.7μm）;流速：0.2mL/min;柱温：40℃;进样量：10μL。流动相：A相：碳酸氢铵溶液（1.0mmol/L），B相：甲醇。梯度洗脱：0、2.0、3.0、4.0、6.0、9.0min的A相与B相分别为95%、95%、25%、10%、10%、95%、95%、5%、5%、75%、90%、90%、5%、5%，使TeA、AOH、TEN和AME完全分离。

二、 结果

2.1 方法的精密度、回收率技术参数

利用该方法做样品回收率与精密度试验，取空白样品，分别添加2.0ug/L（0.2 ug/L）、10.0ug/L（1.0 ug/L）、100ug/L（10 ug/L）三个浓度，每个浓度3个平行，每个平行6次测定。4种交链孢霉毒素的回收率试验在83.1%-116.0%，相对标准偏差为1.24%-2.99%，满足检测分析的要求。不同加标浓度平均回收率分别为TeA：97.0、99.05和103.3 ;AOH：100.5、99.05和100.0;TEN：102.1、100.6和99.8;AME：102.1、100.3和100.2。

2.2 精密度试验

分别取2.0ug/L（0.2 ug/L）、10.0ug/L（1.0 ug/L）、100ug/L（10 ug/L）混合标准溶液，每天每种浓度测定2次，重复测定6天，3个浓度组的相对标准偏差分别为TeA：2.85、2.99和2.63 ;AOH：2.10、1.24和1.53;TEN：2.16、1.81和1.65;AME：2.26、1.89和1.72。精密度、回收率符合实验室质量控制规范食品理化检验GB/T 27404-2008方法确认的技术要求，以此法测定小麦粉中交链孢霉毒素的含量，结果比较满意。

三、讨论

本试验探讨了以液相色谱-质谱/质谱法测定小麦粉中TeA、AOH、TEN和AME4种毒素的检验方法。采用不同提取方式提取效率不同，提取效率由低到高依次为：超声、刀头式均质机，旋转摇床，高速振荡器，刀头式均质机，旋转摇床，随着提取时间的延长，提取效率提高，四种提取方式中高速振荡器提取效率最高[3]。选用HLB小柱净化，上样溶液的有机试剂含量控制在14%左右（<20%），选择最佳色谱条件、质谱条件，以LC-MS/MS测定，采用含基质标准曲线，外标法定量。4种交链孢霉毒素相对标准偏差范围在1.24%-2.99%，回收率范围在83.1%-116.0%之间。各项技术指标符合实验室质量控制规范食品理化检验GB/T 27404-2008方法确认的技术要求，该方法操作简单、分析速度快、灵敏度高，是理想的测定粮食作物中交链孢霉毒素的方法。

参考文献

杨胜利，董子明，裴留成，丁兰平，张慧芳，宋爱云，宫亚欧，刘桂亭，薛乐勋.河南林县居民粮食中互隔交链孢霉及其毒素污染和人群暴露状况研究[J].癌变.畸变.突变.2007（01）

裴留成，苗健，芦荣华，娄振岭，郑香梅，杨胜利.河南省食管癌高低发区粮食中互隔交链孢霉毒素的化学检测[J].河南医科大学学报.1991（01）

蒋黎艳，赵其阳，龚蕾，刘雁雨，张耀海，马良，焦必宁.超高效液相色谱串联质谱法快速检测柑橘中的5种链格孢霉毒素[J].分析化学.2015（12）陈自强.劳动卫生与职业病学.1版.北京：人民卫生出版社，2000：40