刘惠芬 王安皆 刘文光 张凤林 周丽霞 华丽峰 唐文倩 李云芝

摘要：甲磺酸培氟沙星是喹诺酮类的第3代抗菌药物，对苏云金芽孢杆菌和黑胸败血芽孢秆菌感染引起的家蚕细菌性败血病，接菌后添食24 h有效防治质量浓度最低为5.0 mg/L;先用苏云金芽孢杆菌对5龄起蚕进行皮下穿刺接菌，8 h内添食药物对细菌病有较好的防治效果;采用苏云金芽孢杆菌对5龄起蚕进行皮下穿刺，接菌后添食2、4、8、12 h的药叶，最低防治质量浓度分别为20.0、10.0、10.0、5.0 mg/L;5龄起蚕添食2、4 h的药叶后接菌，有效防治质量浓度为20.0 mg/L，8 h后喂食试验浓度内药物防治效果已不佳。采用质量浓度为200.0、100.0 mg/L的甲磺酸培氟沙星和盐酸环丙沙星溶液蘸桑叶饲蚕，其全茧量及茧层率与对照组比较未见显著差异。

关键词：抗菌药物;甲磺酸培氟沙星;家蚕;细菌性败血病;防治效果

中图分类号：S884.4   文献标志码： A  文章编号：1002-1302（2020）23-0175-03

培氟沙星（Pefloxacin）由法国Rogeo Bollon公司开发[1]，在临床上主要采用甲磺酸盐即甲磺酸培氟沙星，是喹诺酮类的第3代新型抗菌药物，对革兰氏阳性及阴性菌包括金黄色葡萄球菌、大肠杆菌及对青霉素、头孢菌素、氨基糖苷类耐药菌株均有效，对复制期及静止期菌株也有效[2]，培氟沙星具有专一性，作用于DNA促旋酶的A亚基，从而抑制DNA促旋酶的功能，使DNA复制受阻，影响DNA解链、切割和重新封闭等过程，导致DNA降解及细菌死亡[3]，是一种广谱、高效、低毒的药物，以吸收快、生物利用度好、组织药物浓度高、体内分布广、维持时间长且无耐药性为特征[4]。培氟沙星对家蚕常见细菌病的防治效果未见报道，本研究以蚕业生产上常用的细菌病防治药物盐酸环丙沙星作为对照，通过生物试验研究其对家蚕细菌性败血病的防治效果。

1 材料与方法

1.1 供试药剂及家蚕和病原菌

1.1.1 药剂 甲磺酸培氟沙星及盐酸环丙沙星均为市售产品，由山东省蚕业研究所统一采购。

1.1.2 家蚕品种 供试家蚕品种为菁松×皓月，由山东广通蚕种集团有限公司提供。蚕卵正常环境下催青孵化，幼虫在24～28 ℃、相对湿度约70%环境下桑叶饲育。

1.1.3 病原菌及其菌悬液 苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）、黑胸败血芽孢杆菌（Bacillus bombysepticus），均由笔者所在研究室保存。将以上2种病原菌的营养琼脂斜面培养物1支，用2 mL灭菌水洗下菌悬液备用。

1.1.4 试验时间与地点 试验于2019年春季在山东省蚕业研究所家蚕病理实验室进行。

1.2 甲磺酸培氟沙星对家蚕细菌性败血病的防治效果试验

1.2.1 添食不同质量浓度药叶对细菌性败血病的防治效果试验 取苏云金芽孢杆菌、黑胸败血芽孢杆菌，分别对5龄起蚕进行皮下穿刺接菌，然后饲喂喷洒不同药物及不同质量浓度的桑叶，24 h调查。每区10头家蚕，每个处理重复2区，在（25±1） ℃条件下饲养。

1.2.2 接种病原菌后不同时间添食药叶对细菌性败血病的防治效果试验 取苏云金芽孢杆菌对5龄起蚕进行皮下穿刺接菌后，饲喂正常桑叶至6、8、12 h，再饲喂喷洒不同质量浓度（320.0、160.0、80.0、40.0、20.0、10.0、5.0 mg/L）药物的药叶24 h调查。每区10头家蚕，每个处理重复2区，在（25±1） ℃条件下饲养。

1.2.3 接种病原菌后饲喂不同时间、不同质量浓度药叶对细菌性败血病的防治效果试验 取苏云金芽孢杆菌对5龄起蚕进行皮下穿刺接菌后，饲喂不同质量浓度（20.0、10.0、5.0、2.5 mg/L）药叶2、4、8、12 h，再饲喂正常桑叶，24 h调查。每区10头家蚕，每个处理重复2区，在（25±1） ℃条件下饲养。

1.2.4 幼蟲饲喂不同时间、不同质量浓度药叶后接种病原菌的发病情况 5龄起蚕饲喂不同时间（2、4、8、12 h）、不同质量浓度（20.0、10.0、5.0和 2.5 mg/L）药叶后穿刺接菌苏云金芽孢杆菌病原菌，然后饲喂正常桑叶，24 h调查。每区10头家蚕，每个处理重复2区，在（25±1） ℃条件下饲养。

1.3 配制药液的保存期试验

取苏云金芽孢杆菌对5龄起蚕进行皮下穿刺接菌，然后饲喂喷洒配制不同时间（0、48 h）药液的桑叶，24 h调查。每区10头家蚕，每个处理重复2区，在（25±1） ℃条件下饲养。

1.4 对茧质影响试验

自4龄起蚕，采用质量浓度为200.0、100.0 mg/L 甲磺酸培氟沙星和盐酸环丙沙星溶液蘸桑叶饲蚕，4龄起每天饲喂药叶8 h，其余时间饲喂普通桑叶至上蔟，空白对照组饲喂普通桑叶至上蔟，上蔟9 d采茧。每区60头家蚕，每个处理重复3区，在（25±1） ℃条件下饲养。调查各区全茧量、茧层量及茧层率等。

1.5 数据统计处理

数据采用SPSS 20.0进行分析。

2 结果与分析

2.1 甲磺酸培氟沙星对家蚕细菌性败血病的防治效果

2.1.1 添食不同浓度药叶的防治效果 取苏云金芽孢杆菌、黑胸败血菌，分别对5龄起蚕进行皮下穿刺接菌，然后饲喂喷洒不同质量浓度甲磺酸培氟沙星和盐酸环丙沙星药液的桑叶，24 h调查，由表1可知，添食喷洒甲磺酸培氟沙星和盐酸环丙沙星药液质量浓度为5.0 mg/L桑叶，接种病原菌的家蚕发病率均为0，说明上述2种药物对苏云金芽孢杆菌、黑胸败血菌引起的家蚕败血病均有很好的防治效果。

2.1.2 接种病原菌后不同时间添食药叶对细菌性败血病的防治效果 取苏云金芽孢杆菌对5龄起蚕进行皮下穿刺接菌，先饲喂正常桑叶，经不同时间后再饲喂喷洒不同质量浓度药物的桑叶，至24 h调查，由表2可知，接种6、8 h后开始添食质量浓度>20.0 mg/L（320.0～20.0 mg/L）甲磺酸培氟沙星药液的桑叶对家蚕细菌性败血病有较好的防治效果，接种后 12 h 开始添食药叶，防治效果较差。

2.1.3 接種病原菌后饲喂不同时间、不同质量浓度药叶对细菌性败血病的防治效果 取苏云金芽孢杆菌对5龄起蚕进行皮下穿刺接菌，饲喂不同时间、不同质量浓度的药叶后再饲喂正常桑叶至24 h调查，表3结果显示，接菌后添食2、4、8、12 h的药叶，最低防治质量浓度分别为20.0、10.0、10.0、5.0 mg/L。

2.1.4 添食不同时间、不同质量浓度药叶后接种病原菌的发病试验 5龄起蚕添食不同时间、不同质量浓度药叶后穿刺接种苏云金芽孢杆菌病原菌，然后饲喂正常桑叶24 h调查，由表4可知，添食 20.0 mg/L 药叶2 h和4 h区防治效果较好，添食 2 h 和4 h区效果优于添食8 h和12 h区。

2.2 配制药液的保存期试验

取苏云金芽孢杆菌对5龄起蚕进行皮下穿刺接菌，然后饲喂配制0 h和48 h的甲磺酸培氟沙星蘸药桑叶，24 h调查，由表5可知，配制48 h 20.0、10.0 mg/L药叶防病效果与配制后即刻使用的药液相同，5.0、2.5 mg/L的防治效果略差。

2.3 对茧质的影响

按照“1.4”节方法处理家蚕，4龄起每天饲喂药叶 8 h，其余时间饲喂普通桑叶至上蔟，调查各区全茧量、茧层率等。由图1、图2结果可知，4～5龄饲喂200.0、100.0 mg/L的甲磺酸培氟沙星和盐酸环丙沙星对家蚕全茧量和茧层率无显著影响。

3 结论

本研究发现，对5龄起蚕进行皮下穿刺接种苏云金芽孢杆菌和黑胸败血菌，然后饲喂24 h喷洒不同质量浓度甲磺酸培氟沙星的药叶，对2种病菌引起的家蚕细菌性败血病有效防治最低质量浓度为5.0 mg/L;先用苏云金芽孢杆菌对5龄起蚕进行皮下穿刺接菌，饲喂正常桑叶不同时间后，再饲喂喷洒不同质量浓度药物的桑叶至24 h调查，结果为接菌8 h内添食甲磺酸培氟沙星，对细菌病有较好的防治效果;采用苏云金芽孢杆菌对5龄起蚕进行皮下穿刺，接菌后添食2、4、8、12 h药叶，再饲喂正常桑叶至24 h调查，最低防治质量浓度分别为20.0、10.0、10.0 、5.0 mg/L;5龄起蚕添食2、4 h药叶再接菌，有效防治质量浓度为20 mg/L，8 h后喂食试验质量浓度内药物防治效果已不佳，这可能与家蚕生长或代谢速度加快导致体内药物质量浓度降低有关。

4～5龄家蚕，采用质量浓度为200.0、100.0 mg/L甲磺酸培氟沙星和盐酸环丙沙星溶液蘸桑叶饲喂，其全茧量及茧层率与对照组未见显著差异。本研究初步证实，甲磺酸培氟沙星可以用于家蚕常见细菌病的防治。

参考文献：

[1]马明华，纪秀贞. 甲磺酸培氟沙星合成工艺改进[J]. 中国医药工业杂志，1996（3）：100-101.

[2]张 薇，李生正，刘福利. 喹诺酮类抗菌药物研究进展[J]. 西北药学杂志，2007，22（3）：157-158.

[3]李引乾，扈文杰. 培氟沙星在兽医临床中的应用[J]. 动物医学进展，1997，18（4）：10-13.

[4]刘晓强，靳亚平，李引乾，等. 培氟沙星对几株常见致病菌的体外抗菌后效应[J]. 中国兽医杂志，2011，47（2）：74-76.方晓敏，涂 枫，李 悦，等. 苏紫黑猪5世代屠宰性能及肉品质特性分析[J]. 江苏农业科学，2020，48（23）：178-180.