徐文慧，常丽静，段连政，姜柔齐，宫喜艳，陈 新，邱智东

（长春中医药大学，长春 130117）

黄芪为豆科植物蒙古黄芪Astragalus membranaceus（Fisch.）Bge.var.mongholicus（Bge.）Hsiao 或膜荚黄芪Astragalus membranaceus（Fisch.）Bge.的干燥根，始载于《神农本草经》[1]，在《本草纲目》中称为“补药之长”。黄芪具有补气升阳，固表敛汗，利水消肿，生津养血，行滞通痹，托毒排脓，敛疮生肌等功效[2-5]。据统计，目前约15%临床使用的方剂中均含有黄芪，且多作为君药使用，2018 年国家发布了《古代经典名方目录（第一批）》[6]100 首，其中10%的方剂中含有黄芪。黄芪药材质量的优劣直接关系到黄芪临床应用的功效，因此如何提高黄芪药材质量的优质性、稳定性和可控性是目前亟待解决的问题。

黄芪的入药部位为地下部分的根系，其为双子叶植物，属于直根系。直根系由主根、侧根及纤维根组成，但在实际处理黄芪药材过程中，常称其纤维根为须根。《中国药典》2015年版中规定黄芪为春、秋二季采挖，除去须根和根头，晒干。黄芪中主要成分为皂苷类、黄酮类及多糖类[7-9]，其中黄芪甲苷和毛蕊异黄酮葡萄糖苷为其有效成分，也作为其质量控制的指标性成分。本次研究通过对不同产地、不同部位黄芪药材中的黄芪甲苷和毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量进行检测、对比、分析，旨在为黄芪药材入药部位的合理应用提供依据，提高黄芪药材临床应用的科学性、合理性，尤其为制备均一、可控的经典名方“物质基准”提供优质药材资源。

1 材料

1.1 仪器 FA2004B 型电子天平（上海天美天平仪器有限公司），安捷伦1260 高效液相色谱仪（美国安捷伦公司），KQ-250B 型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），SY-2000 旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂），DZKW-4 电子恒温水浴锅（北京中兴伟业仪器有限公司），DE-100g 万能高速粉碎机（浙江红景天工贸有限公司）。

1.2 试剂 黄芪甲苷对照品（批号：110781-201616，纯度97.4%，中国食品药品检定研究院），毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品（批号：111920-201606，纯度97.6%，中国食品药品检定研究院）。甲醇（分析纯，北京化工厂），乙醇（分析纯，北京化工厂），正丁醇（分析纯，北京化工厂），氨水（分析纯，西陇科学股份有限公司），甲酸（色谱纯，天津市光复精细化工研究所），乙腈（色谱纯，美国Fisher 公司），屈臣氏蒸馏水（广州屈臣氏食品饮料有限公司），娃哈哈纯净水（吉林娃哈哈启力饮料有限公司）。

1.3 药材 不同产地黄芪药材样品10 批，经长春中医药大学张景龙教授鉴定均为豆科植物蒙古黄芪Astragalus membranaceus（Fisch.）Bge.var.mongholicus（Bge.）Hsiao 的干燥根。各黄芪样品产地见表1。

表1 试验用黄芪药材采集情况

将各产地黄芪样品按各部位分开，即根头、主根、侧根、纤维根以及地下全株，分别用粉碎机进行粉碎，过筛，使其全部通过四号筛，将药材粉末分别装于自封袋中，于干燥阴凉处密封保存。

2 方法与结果

2.1 黄芪甲苷的含量测定 黄芪甲苷的含量测定方法参照《中国药典》2015 年版。

2.1.1 色谱条件 色谱柱为ZORBAX Eclipse Plus C18，流动相为乙腈—水（32:68），对照品进样量为10 μL，20 μL，供试品进样量为10 μL，柱温为25 ℃。蒸发光检测器参数：蒸发器温度60 ℃，雾化器温度60 ℃，载气流速1.2SLM。

2.1.2 对照品溶液的制备 取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL 含0.5 mg 的溶液，即得。

2.1.3 供试品溶液的制备 按《中国药典》2015 年版一部黄芪药材[含量测定]项下黄芪甲苷含测供试品溶液的制备方法，制备黄芪药材不同部位含测供试品溶液。

2.1.4 供试样品含量测定 分别精密吸取对照品溶液10 μL、20 μL，供试品溶液10 μL，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算，即得。

2.2 毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定 毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定方法参照《中国药典》2015 年版。

2.2.1 色谱条件 色谱柱为ZORBAX Eclipse Plus C18，以乙腈为流动相A，以0.2%甲酸溶液为流动相B，采用梯度洗脱：0～20 min，20%～40%A，80%～60%B；20～30 min，40%A，60%B；流速1.0 mL/min，进样量为10 μL，柱温为 25 ℃，检测波长为260 nm。

2.2.2 对照品溶液的制备 取毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成1 mL含50 μg的溶液，即得。

2.2.3 供试品溶液的制备 按《中国药典》2015 年版一部黄芪药材[含量测定]项下毛蕊异黄酮葡萄糖苷含测供试品溶液的制备方法，制备黄芪药材不同部位含测供试品溶液。

2.2.4 供试样品含量测定 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，测定，即得。

2.3 黄芪甲苷含量测定结果 按2.1 项下方法对10 批不同产地黄芪不同部位黄芪甲苷含量进行测定，测定结果见表2，测定结果显示，其中纤维根中黄芪甲苷含量最高，而根头中黄芪甲苷含量最低。

2.4 毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量测定结果 按2.2 项下方法对10 批不同产地黄芪不同部位毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量进行测定，测定结果见表3，测定结果显示，其中主根中毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量最高，而根头中毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量最低。

表2 不同产地黄芪不同部位黄芪甲苷含量测定结果（，n=6） %

表2 不同产地黄芪不同部位黄芪甲苷含量测定结果（，n=6） %

表3 不同产地黄芪不同部位毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量测定结果（，n=6） %

表3 不同产地黄芪不同部位毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量测定结果（，n=6） %

3 分析与讨论

3.1 不同产地黄芪不同部位黄芪甲苷含量相关性分析 以黄芪甲苷含量为参数对黄芪药材不同部位，即根头、主根、侧根、纤维根及地下全株进行聚类分析，结果（图1）表明黄芪药材的不同部位黄芪甲苷含量存在显著性差异，聚类分析的结果表明，当欧式距离为10 时，黄芪药材中的不同部位根据其黄芪甲苷的含量差异大致可分为三大类，其中主根、侧根和地下全株为一类，而其中主根和侧根的黄芪甲苷含量最为相似，而纤维根含量较高，根头含量较低，二者与其他部位差异较大，故纤维根及根头各为单独一类。

3.2 不同产地黄芪不同部位毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量相关性分析 以毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量为参数对黄芪药材不同部位，即根头、主根、支根、须根及全株进行聚类分析，结果（图2）表明黄芪药材的不同部位毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量存在显著性差异，聚类分析的结果表明，黄芪药材中的不同部位根据其毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量差异大致可分为三大类，其中主根、侧根含量最为接近，因此为一类，而其纤维根与地下全株为一类，根头含量较低，故根头单独为一类。

图1 不同部位黄芪甲苷含量聚类分析结果

图2 不同部位毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量聚类分析结果

3.3 讨论 该次实验中选用十批不同产地黄芪，包括甘肃、河北、内蒙古等地，均为黄芪的道地主产区，具有一定代表性。采用HPLC-ELSD 法对十批不同产地黄芪不同部位黄芪甲苷进行含量测定，结果表明黄芪药材各部位中主根和侧根黄芪甲苷含量接近，而纤维根黄芪甲苷含量最高，约为其主根和侧根的近3倍，根头中黄芪甲苷含量最低。据研究表明，黄芪甲苷是黄芪正性肌力作用的主要活性成分[10]，其还具有广泛的药理作用，如调节免疫[11]、缺血保护、心脏保护、抗炎、抗氧化、抗病毒和抗肿瘤等作用[12-15]。而《中国药典》2015 年版中规定黄芪为春、秋二季采挖，除去须根和根头，晒干。因此在黄芪的实际产地加工过程中，多采用“揉搓”等方式对黄芪原药材进行处理[16]，大量破坏其纤维根及侧根，这就造成了黄芪甲苷的大量浪费。因此建议能够取下黄芪原药材纤维根，对黄芪甲苷成分进行提取处理，让黄芪药材得到合理化应用，避免资源的大量浪费。

另一含测指标毛蕊异黄酮葡萄糖苷也为黄芪中主要药效成分，其具有抗氧化、抗病毒、抗癌、降血糖、神经保护、骨骼保护、改善疲劳等多方面的药理作用[17-18]。根据以上对不同部位的黄芪甲苷及毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量相关性分析，发现两含量指标中，主根、侧根均为一类，说明其含量相似度较高，虽然纤维根中黄芪甲苷含量较高，但其毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量则明显低于主根及侧根，因此若对纤维根进行保留，在实际黄芪药材检验中则会造成部分黄芪药材毛蕊异黄酮葡萄糖苷含测结果不合格，而且由于采收方式及运输方式的影响，造成各批次黄芪药材中纤维根占比差异较大，严重影响黄芪药材质量的稳定性，因此不建议在原药材中保留纤维根。

综上所述，在黄芪原药材处理过程中，应将其纤维根完整取下，并对其黄芪甲苷进行提取加以应用，有效避免资源浪费。本实验证明了黄芪药材处理的科学性及合理性，让黄芪药材得到了更加合理、有效的应用。