原发性肝癌中血清PTN和GP73的表达及其在临床诊断中的意义

2020-02-18张黎杨荣赵云

肝脏 2020年1期

张黎杨荣赵云

多效生长因子(Pleiotrophin, PTN)是一种对肝素具有高亲和力的分泌生长因子[1]。经实验证实，PTN在肿瘤细胞中发挥了促血管生成和转移等重要生物学作用[2]。高尔基体跨膜糖蛋白73(Golgi protein-73, GP73)是一种在人类上皮细胞中表达的跨膜糖蛋白[3]。有研究发现GP73在肝癌、肺腺癌等肿瘤疾病中表达上调[4]。本研究旨在检测PHC中PTN和GP73的表达情况，进一步探讨两者联合检测诊断PHC的价值，为PHC的早期诊疗提供有效的生物学标志物。

资料与方法

一、一般资料

2017年9月至2018年7月，苏州大学附属张家港医院共招募PHC患者148例。另有100名健康志愿者和171名非健康志愿者，包括35例肝硬化患者、75例病毒性肝炎患者，30例转移性肝癌患者和31例其他良性肝病患者作为对照。所有PHC病例通过临床病理结果诊断，根据世界卫生组织分级体系对肿瘤细胞分化程度进行评估，根据TNM分期体系判断肿瘤分期；肝硬化由组织学检查或门静脉高压症的临床表现诊断；病毒性肝炎包括乙型肝炎病毒(HBV)和丙型肝炎病毒(HCV)感染由病毒检测结果诊断；转移性肝癌的诊断是通过采用TNM分期系统对病史中有明确诊断的患者进行评估得出；良性肝病包括酒精或药物引起的肝损伤、脂肪肝和肝血管瘤。本项研究方案内容已获我院伦理委员会批准，所有受试者均已签署书面知情同意。PHC患者(n=148)的男女比例为95/53，年龄(48.77±7.98)岁，健康志愿者(n=100)的男女比例为70/30，年龄(51.33±8.34)岁，肝硬化患者(n=35)的男女比例为24/11，年龄(51.27±9.14)岁，病毒性肝炎患者(n=75)的男女比例为47/28，年龄(49.86±9.31)岁，转移性肝癌患者(n=30)的男女比例为21/9，年龄(50.16±9.02)岁，其他良性肝病患者(n=31)的男女比例为19/12，年龄(49.56±8.87)岁。各组受试者年龄、性别比较差异无统计学意义(P>0.05)。

收集所有受试者临床资料，并行辅助检查：血常规、尿常规、血生化。抽取清晨空腹外周血3.5 mL，于4 ℃离心(3 000×g)20 min，分离血清，-80 ℃保存备用。排除标准：(1)患者在1个月内接受华法林或维生素K治疗；(2)血样本受到污染或含有沉淀等不明物质；(3)样本量不足以进行检测。

二、研究方法

采用PTN酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒(eBioscience，美国)、GP73 ELISA试剂盒(上海研谨生物科技有限公司，中国)分别检测血清PTN、GP73浓度，450 nm波长酶标仪测定OD值，根据标品吸光度值绘制线性回归曲线，利用曲线方程带入样本吸光度值进行浓度计算。具体方法遵循制造商说明。

三、统计方法

结果

一、各组血清PTN表达水平比较

PHC患者血清PTN水平为(547.28±79.31)ng/mL，健康志愿者为(291.15±90.53)ng/mL，肝硬化为(388.82±73.37)ng/mL，病毒性肝炎为(363.28±134.55)ng/mL，转移性肝癌为(424.16±131.29)ng/mL，其他良性肝病为(293.45±98.22)ng/mL，PHC患者血清PTN水平显著高于健康志愿者和非健康志愿者(P<0.05)。

二、各组血清GP73表达水平比较

PHC患者血清GP73水平显著高于健康志愿者、病毒性肝炎患者和其他良性肝病患者(P<0.05)，而明显低于肝硬化患者和转移性肝癌患者(P<0.05)。见表1。

三、PTN、GP73的表达水平与PHC临床病理特征相关

在PHC患者中，有肝硬化的PTN水平显著高于无肝硬化患者；肿瘤直径>5 cm的PTN水平显著高于直径≤5 cm的患者；肿瘤低分化患者的血清PTN显著高于中、低分化患者；甲胎蛋白(AFP)水平高的患者PTN水平更高；肿瘤转移患者的血清PTN水平明显高于无转移患者；根据TNM分期，Ⅲ～Ⅳ期患者血清PTN水平显著高于Ⅰ～Ⅱ期，以上结果的差异具有统计学意义(P<0.05)。肿瘤低分化PHC患者的GP73水平显著高于中、低分化患者；AFP高水平患者的GP73水平显著高于水平低的患者；肿瘤转移患者的血清GP73水平明显高于无肿瘤转移患者；根据TNM分期，Ⅲ～Ⅳ期患者血清GP73水平显著高于Ⅰ～Ⅱ期，差异具有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表1 各组血清GP73表达水平比较

注：与PHC比较，aP<0.05

四、PTN与GP73联合检测与PTN、GP73单独检测的灵敏度、特异度、准确度比较

表3所示，PTN与GP73联合检测的灵敏度、特异度、准确度显著高于PTN、GP73单独检测(P<0.05)。PTN、GP73单独检测的灵敏度、特异度、准确度相比较差异无统计学意义(P>0.05)。PTN与GP73联合检测的AUC大于PTN或GP73单独检测。

讨论

目前PTN、GP73与PHC的发生、发展机制研究尚未明确。有报道发现，PTN与多种人类癌症相关，包括乳腺癌、胰腺癌和肺癌等[5]。Du等[6]发现PTN在癌症患者血清中表达上调，敏感度为78.4%，特异度为66.7%。本研究发现与健康和非健康志愿者相比，PHC患者的PTN表达水平显著升高，且与PHC患者的肿瘤低分化、转移、大小，AFP水平及TNM分期相关。另外，PTN在诊断PHC中的灵敏度为78.2%，特异度为86.7%，准确度为80.1%，与之前的研究结果类似。

Yong等[7]通过实验证实，肝癌组织中的GP73水平高于癌旁组织，且GP73与血管浸润、TNM分期等病理特征相关。本研究同样发现，GP73在PHC患者血清中表达升高，且与肿瘤低分化、TNM分期及转移有关。另外，PTN与GP73联合检测的特异度、敏感度及准确度较高，有可能应用于PHC的早期诊断，并对转移性肝癌等肝脏疾病发挥辅助诊断作用。