李祥苏 金星星 王冬冬 吴旭东

肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)是恶性程度最高的肿瘤之一[1-2]，临床早期筛查和诊断尤为关键[3]。白细胞衍生趋化因子2(Leukocyte cell-derived chemotaxin-2, LECT2)是一种免疫趋化蛋白，属于肽酶 M23家族[4]。近年来发现其与肿瘤细胞迁移和血管生成有着密切关系，被认为是肿瘤诊断和治疗的潜在靶点[5]。本研究旨在探讨血清LECT2水平检测对HCC的临床诊断价值。

资料与方法

一、研究对象

此次基于医院的病例对照研究，共纳入在盐城市第一人民医院(2016年8月至2018年1月)住院的60例HCC患者，60例肝硬化患者，60例慢性乙型肝炎患者。此外，从门诊体检部选健康体检者60名，作为健康对照组。四组人群的年龄、性别差异无统计学意义(P均>0.05)。本研究通过本院伦理委员会批准，参与者均签署纸质告知同意书。

二、人群定义

(一)HCC的诊断 经影像学(如超声或CT)提供证据后，后经病理首次确诊为HCC[2]。根据巴塞罗那临床肝病中心分期标准，将0期和A期定义为早期HCC[6]，共计51例。

(二)慢性乙型肝炎的诊断 根据2015年更新发布的我国慢性乙型肝炎防治指南[7]，慢性乙型肝炎病毒感染需提供以下证据：乙型肝炎表面抗原和/或病毒DNA阳性6个月以上，且患者HBV DNA拷贝数>103/mL。

(三)肝硬化的诊断 根据2014年科技部发布的指南[8]：以肝活组织检查为金标准，需提供弥漫性肝纤维化伴假小叶证据。

(四)健康对照人群的定义 需符合以下条件：1.体检时生化指标无异常；2.既往个人无肝病病史；3.无恶性肿瘤等严重疾病；4.无肝病家族史。

三、实验室检测

三组患者在入院后次日一并收集清晨空腹血，门诊健康对照人群同样方法收集清晨空腹血。血样收集后统一离心并冻存于-80℃冰箱。血清LECT2水平采用商业化ELISA试剂盒(编号：No.SEF541Hu；CLOUD-CLONE公司)。血清血清甲胎蛋白(α-fetoprotein, AFP)采用酶联免疫吸附分析方法测定(Abbott公司)。血生化检查采用Hitachi 7 600 Auto-Analyzer。以上检测均参照厂商说明书进行并重复。

四、统计学方法

连续变量采用四分位法来表示。四组之间均值比较采用One-way ANOVA(post-hoc比较采用LSD法)。用二分类变量logistic回归建立方程(因变量：患有HCC与否；自变量：AFP、LECT2)，产生新变量(预测概率)。受试者工作特征(Receiver operating characteristics, ROC)曲线用于评价AFP、LECT2以及AFP和LECT2组合的新变量对HCC及早期HCC的鉴别能力，比较ROC下面积(AUC)、敏感性及特异性。最佳cut-off值根据Youden指数方法来确定。以上统计学分析及绘图采用Stata(11.2版)、Prism(第6版)以及SPSS(24.0版)。样本量效力采用G*Power(3.1版)计算。双侧P值<0.05被认为有统计学意义。

结 果

一、血清中AFP和LECT2在四组人群中的水平

如图1A所示，HCC患者的血清AFP水平[70.6(15.6～152.3)ng/mL]明显高于三个对照组，包括健康人群[6.5(3.9～8.2)ng/mL;P<0.001]，慢性乙型肝炎患者[23.8(19.5～31.2)ng/mL;P<0.001]以及肝硬化患者[24.8(14.7～28.6)ng/mL;P<0.001]。同时，HCC患者的血清LECT2水平[59.9(46.3～78.7)ng/mL]显著高于三个对照组，即健康人群[40.8(31.4～47.3)ng/mL;P<0.001]，慢性乙型肝炎患者[40.8(25.2～50.3)ng/mL;P<0.001]以及肝硬化患者[41.7(32.2～52.9)ng/mL;P<0.001](图1B)。

二、诊断HCC

如表1所示，根据指南，我们选定20 ng/mL作为AFP的cut-off值，其ROC下面积为0.785，同时其敏感性为0.700，特异性为0.550。根据Youden系数原则，LECT2的cut-off值为56.34 ng/mL。该AUC为0.817，敏感性为0.583，特异性为0.911，两者间AUC并无显著差异(P=0.538)。根据logistic回归方程，得到AFP与LECT2组合的新变量，即Combine，根据Youden系数原则，Combine的cut-off值为0.505。该AUC为0.923。同时其敏感性为0.783，特异性为0.994，优于AFP(P<0.001)和LECT2(P<0.001)。

三、诊断早期HCC

同理选择20 ng/mL作为AFP的cut-off值，其判断早期HCC的AUC为0.805，同时其敏感性为0.725，特异性为0.550。同上，选择56.34 ng/mL作为LECT2的cut-off值，其判断早期HCC的AUC为0.817，同时其敏感性为0.588，特异性为0.911。两者间AUC并无显著差异(P=0.833)。Combine的cut-off值仍选为0.505，该AUC为0.932。同时其敏感性为0.804，特异性为0.994，优于AFP(P=0.002)和LECT2(P=0.003)。

A.血清AFP水平；B.血清LECT2 水平[单位均为ng/mL，以中位数(四分位间距)显示]。AFP，甲胎蛋白；CHB，慢性乙型肝炎；LECT2，白细胞衍生趋化因子2；HCC，肝细胞癌

表1 AFP、LECT2以及两者结合的新变量在肝癌和早期肝癌中的诊断价值

*AFP vs.LECT2，P=0.538；AFP vs.Combine，P<0.001；LECT2 vs.Combine，P<0.001；#AFP vs.LECT2，P=0.833；AFP vs.Combine，P=0.002；LECT2 vs.Combine，P=0.003；AFP, 甲胎蛋白；AUC，ROC曲线下面积；Combine，组合的新变量；LECT2，白细胞衍生趋化因子2

讨 论

临床工作中，常以影像学检查辅以血清肿瘤标志物检测的方法来诊断HCC[2]。AFP是目前HCC筛查和临床诊断的最主要血清指标，但AFP对病灶较小或早期HCC的敏感性较差，与慢性肝炎及肝硬化患者区别时特异性较低[3]。

近年，Chen等发现：在HCC发病过程中，LECT2可以通过与癌细胞的跨膜蛋白血管内皮生长因子受体2相互作用，抑制其磷酸化，从而下调蛋白质酪氨酸磷酸酶1B所诱导的肝癌细胞侵袭转移[9]。此外他们的研究还证实：LECT2可选择性地抑制血管内皮生长因子的表达，并与其受体结合，磷酸化血管内皮生长因子受体2，抑制其下游通路，达到阻止癌细胞侵袭的作用[10]。Okade等通过建立一项基于医院的病例对照研究[5]，发现：HCC患者外周血中LECT2水平明显高于慢性肝病者以及健康对照人群。研究者认为LECT2可作为判断HCC患者的生物分子标记物[5]。该研究有以下不足：1.仅纳入共计80例，样本量较小；2.慢性肝病患者也尚未区分肝硬化和慢性HBV感染者；3.且未收集同期血清中AFP水平资料。

在本项研究中，根据我国特殊的HCC发病情况，针对性收集了高危人群(慢性乙型肝炎和肝硬化患者)以及健康人群相关资料，与HCC患者进行比较血清中LECT2水平。此外，同时期血清AFP水平也进行了采集，分别独立和与LECT2联合诊断HCC。本研究发现：与健康对照人群、慢性肝炎及肝硬化患者相比，HCC患者血清中LECT2水平明显升高。单独诊断HCC或早期HCC时，LECT2表现和AFP无异，但其特异性明显优于AFP。LECT2与AFP联合建立新变量，明显提升了诊断准确性。以上发现提示血清中LECT2可作为临床中HCC筛查诊断的潜在肿瘤标记物，与AFP联合诊断更明显优于两标记物独立诊断。