肖 德

重庆市第七人民医院泌尿外科，重庆 400054

膀胱癌是泌尿系统常见的恶性肿瘤，一旦患病将严重影响患者的生活质量。化疗是治疗膀胱癌的重要方法之一，但是在长期的化疗过程中，肿瘤细胞会产生耐药性，从而导致治疗失败。而当肿瘤细胞出现化疗耐药后，其生物学行为也会发生变化，进而影响膀胱癌的临床疗效，促使肿瘤复发与恶化[1]。丙酮酸脱氢酶激酶(PDK)在哺乳动物中存在4 种异构体，分别为PDK1、PDK2、PDK3 和PDK4，其中PDK4在多种组织中呈高表达[2]，且PDK4已被证实是丙酮酸脱氢酶复合物(PDC)调控物质代谢的中心，是丙酮酸氧化和体内葡萄糖维持平衡的关键调节因子[3]。本文拟就PDK4在膀胱癌化疗耐药中的表达情况及作用进行研究报道，以期为临床膀胱癌治疗提供新的思路。

1 材料与方法

1.1仪器与试剂 RPMI 1640培养液、胎牛血清、0.25%胰蛋白酶购自Sigma公司；青链霉素双抗购自PAN-biotech 公司；PKD4 siRNA 及其阴性对照(健康细胞)由金斯瑞生物科技有限公司提供；总RNA 提取试剂盒、反转录及实时荧光定量PCR 试剂盒、双染色流式法细胞凋亡检测试剂盒、细胞抗凋亡蛋白(Bcl-2蛋白)和β-actin鼠多克隆抗体均来自天根生化科技(北京)有限公司。

1.2方法

1.2.1细胞的培养 实验中用到的人膀胱癌耐药细胞系253J/DOX，其中人膀胱癌253J细胞系由本实验室建立，由10%胎牛血清、青链霉素双抗的RPMI 1640培养液常规培养后获得，在253J/DOX耐药细胞培养液中加入0.5 mg/mL的多柔比星，并加入1.0 mg/mL的长春新碱来维持其耐药性[4]。

1.2.2细胞的转染 用胰蛋白酶来消化253J/DOX细胞，按照转染试剂盒的说明书进行操作，采用2 μg PKD4 siRNA-1、PKD4 siRNA-2、PKD4 siRNA-3和阴性对照(不沉默PKD4的siRNA)分别转染253J/DOX细胞。……