蔡 隽，沈文远，王 慧，谭 珵，赵秀梅，沈啸洪*

(1.天津市医药科学研究所 肿瘤药物研发中心，天津 300020；2.南开大学 医学院，天津 300071；3.天津医科大学总医院 骨科，天津 300052)

胰腺癌(pancreatic cancer)是一种发病隐匿、进程快、预后极差的恶性肿瘤，发病率呈逐年增长趋势，成为威胁人类健康的重要因素[1]。胰腺癌主要临床病理特征是肿瘤细胞周围存在着大量的纤维组织以及丰富的细胞外基质(extracellular matrix，ECM)成分，ECM的作用机制研究是近年来的研究热点。肌腱蛋白C(tenascin-C，TNC)作为一种重要的ECM成分，在胰腺癌组织及其浸润边缘高表达，并与胰腺癌转移和预后差密切相关[2-3]，但目前TNC分子对胰腺癌转移作用的分子机制尚未明确，而且大多数对TNC生物学作用的研究常局限于TNC分子的外源合成或敲除，对TNC过表达的研究较少。本研究拟采用独特的PCR引物设计方法，构建重组人源TNC的真核表达质粒，并建立稳定过表达TNC的胰腺癌细胞系PANC1-TNC，检测分析其细胞迁移、侵袭能力以及上皮间质转化(epithelial mesenchymal transition，EMT)相关标志物的表达，以探讨TNC在胰腺癌转移过程中的作用机制。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 细胞系、质粒及菌株：人胰腺癌细胞系PANC1(中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库)；pBS-HxB.L质粒(Addgene #65414)(北京中原合聚经贸有限公司)；真核表达载体pCMV6-Entry(OriGene公司)；菌株E.coliDH5α感受态细胞(北京全式金公司)。

1.1.2 试剂及试剂盒：Ex Taq酶、限制性内切酶KpnⅠ、EcoRⅤ及T4连接酶(大连宝生物有限公司)；质粒小提及纯化试剂盒(Axygen公司)；G418(Sigma Aldrich公司)；RNA提取试剂盒、反转录试剂、SYBR和LipofectamineTM2000(Invitrogen公司)；Transwell小室(BD公司)；抗TNC抗体、辣根过氧化物酶标记(HRP)的羊抗鼠抗体和HRP标记的羊抗兔抗体(Santa Cruz公司)，抗β-actin、E-cad和N-cad抗体(CST公司)。……